用同源重组法修饰含人α类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体

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采用Rec A蛋白介导的同源重组的方法,对本实验室筛选出的包含完整人α-类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体(BAC)DNA进行删除修饰。首先采用PCR的方法,分别在预删除的HS-40增强子区域的上游和下游克隆长度约为500bp的两段同源序列,并一起克隆到构建载体pBV的XbaI和HindIII位点上,SalI酶切后回收1kb左右的片段并克隆到温度敏感的穿梭质粒pSV-RecA中,转化带有人α-类珠蛋白基因簇的BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸的负筛选,获得发生两次同源重组后只含
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