K-ras原核表达载体的构建及生物学功能研究

• 作 者: 陈思禹 崔越 洪甜 李玲 晋帅 黄俊 尤文叶 韩笑 叶棋浓
• 机 构: 解放军总医院,北京,100853首都师范大学,北京,100048;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;锦州医科大学,辽宁锦州,121000
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2017年3期
• 关键词: 人K-ras基因 Ras/Raf/Mek/Erk 原核表达

目的:构建带Myc标签的K-ras原核表达载体,并初步鉴定其生物学活性.方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增人K-ras结构域的基因编码序列,插入载体pXJ-40得到重组质粒,经BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切鉴定后,West-erR印迹检测其在人293T细胞中的表达;利用GST pull down实验检测与Raf1-RBD的结合情况,验证其生物性活性.结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约570 bp的目的片段,插入载体pXJ-40后构建了Myc-K-ras重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;Myc-K-ras能在293T细胞中正确表达,并能与Raf1-RBD结合,具有生物学活性.结论:为进一步研究K-ras的生物学功能奠定了重要基础.