【摘 要】
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目的 观察TRPV5的表达与成骨细胞中钙离子的量变关系,探讨研究TRPV5对成骨细胞生长、分化的影响,为深入研究成骨细胞生物功能和骨代谢提供线索和依据.方法 用密度梯度离心法
【机 构】
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哈尔滨医科大学骨一科,吉林省辽源市中心医院骨科,吉林大学第一临床医学院
【基金项目】
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中央保健局课题;黑龙江省卫生厅课题
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目的 观察TRPV5的表达与成骨细胞中钙离子的量变关系,探讨研究TRPV5对成骨细胞生长、分化的影响,为深入研究成骨细胞生物功能和骨代谢提供线索和依据.方法 用密度梯度离心法从大鼠骨髓分离、传代培养BMSCs,并将BMSCs诱导为成骨细胞.采用免疫组化法和RT-PCR技术检测BMSCs向成骨细胞诱导分化不同阶段TRPV5的表达情况.应用RT-PCR技术半定量检测1,25(0H)2D3、CuCl2改变TRPV5通道表达情况,同时应用激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子荧光强度的变化.结果 在大鼠BMSCs中可见胞浆内充满棕红色颗粒,染色深,TRPV5为阳性表达;TRPV5在BMSCs向成骨细胞诱导过程中,在诱导后第1天和第5天表达呈+～++,在第10天至成骨细胞组表达呈++～+++;1,25(0H)2D3使成骨细胞TRPV5 mRNA表达增高、细胞内钙离子荧光强度增加;而TRPV5通道阻断剂CuCl2对TRPV5 mRNA表达无影响,但使细胞内钙离子荧光强度降低.结论 TRPV5在大鼠源性BMSCs及其进一步分化而成的成骨细胞中有阳性表达,TRPV5的改变与成骨细胞内钙离子的浓度变化具有一定的相关性.
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