稳定表达人TMPRSS2基因BHK细胞系的建立及其对新城疫弱毒增殖效率评价

• 作 者: 刘伟 李梦娇 郭佩东 孙英杰 仇旭升 谭磊 宋翠萍 廖瑛 孟春春 丁铲
• 机 构: 福建农林大学动物科学学院（蜂学学院）,中国农业科学院上海兽医研究所
• 出 处: 中国兽医科学
• 发表日期: 2021年5期
• 关键词: TMPRSS2 慢病毒包装 BHK细胞 新城疫弱毒
• 基金项目: 上海市兽医生物技术重点实验室开放基金项目(Klab201702)。

为提高细胞培养系统中新城疫病毒的增殖效率,通过构建TMPRSS2过表达的BHK细胞系,探索其对新城疫弱毒增殖的影响。本研究将TMPRSS2基因克隆于噬菌体载体pHAGE中,构建重组质粒pHAGE-TMPRSS2。将重组质粒pHAGE-TMPRSS2以及辅助包装质粒psPAX2和pMD2G共转染至293T细胞并收集上清。将包装好的慢病毒感染BHK细胞,通过Blasticidin加入筛选和有限稀释法将单克隆细胞扩大培养。经RT-PCR和Western-blot鉴定,结果表明,TMPRSS2在BHK细胞中获得了