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为建立小鼠乳腺上皮细胞（MMECs）及奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）分离培养体系，并比较其生长特性。分别无菌采集健康妊娠后期昆明鼠及泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺组织，采用改良混合酶消化结合差速贴壁法分离原代 MMECs 及 BMECs，并进行细胞角蛋白18的免疫荧光鉴定；通过细胞形态跟踪观察评价传代、冻存和复苏后 MMECs 及 BMECs 生物学特性；连续培养及细胞计数绘制 MMECs 及 BMECs 生长曲线。结果显示，从小鼠和奶牛乳腺组织分离的目的细胞，经角蛋白18免疫荧光鉴定证实为 MMECs 及BMECs；汇合的单层 MMECs 多角形，呈铺路石样外观，BMECs 呈鹅卵石样；MMECs 在传至第2代时细胞特有形状消失，而 BMECs 传至第9代时仍保持其鹅卵石样外观；MMECs 只能复苏冻存原代细胞，传代BMECs 均可冻存和复苏。采用改良混合酶消化结合差速贴壁法可获得高纯度的 MMECs 和 BMECs，两种细胞在生长培养特性上存在显著差异。