沉默HepG2细胞核糖核酸酶抑制因子的shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定

来源 :中国医药导报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuhaichao811
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目的 构建针对人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的shRNA逆转录病毒载体,为探讨hRI抗肿瘤作用机制打下基础。方法 用亚克隆法将目的 片段pkd—dsRI和pkd从表达载体pKD—dsRI克隆到pLNCX上,用双酶切筛选得到阳性克隆后,用脂质体法将其转染到人肝癌细胞HepG2细胞中,用800mg/L G418筛选2周,产生稳定的细胞克隆后,用RT—PCR检测细胞中核糖核酸酶抑制因子mRNA表达的变化。结果 双酶切鉴定为阳性克隆。RT—PCR表明,对比空白组(0.790±0.014)和空载体组(0.
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