蛋白酶激活受体-2基因靶向shRNA表达质粒的构建及转染食管癌细胞致沉默效应的研究

• 作 者: 陈金梅 邓全军 谢立群 赵建业 刘彩虹 郑艳敏
• 机 构: 武警医学院附属医院消化内科
• 出 处: 实用医学杂志
• 发表日期: 2013年3期
• 关键词: 食管肿瘤 EC109 小干扰RNA 蛋白酶激活受体2 基因沉默 Esophageal neoplasms EC109 siRNA PAR-2 G

目的：构建靶向蛋白酶激活受体-2（PAR．2）基因的shRNA表达质粒．建立PAR-2基因沉默的食管癌EC109稳定细胞株。方法：针对人PAR-2的mRNA序列，设计并体外合成编码shRNA的两条特异性寡核苷酸序列，分别插入pGFP．V—RS质粒中构建2个shRNA表达质粒（PAR-2shRNA．1、PAR-2shRNA-2）。经过鉴定，然后将表达质粒转染至食管癌细胞EC109中，经嘌呤霉素筛选，获得稳定干扰的细胞株，运用RT．PCR和WesternB1ot检测PAR-2的表达。结果：PAR-2shRNA