【摘 要】
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目的 观察重组质粒pEGFP-Survivin对胆囊癌细胞(GBC-SD)化疗敏感性的影响.方法 以噻唑蓝(MTT)比色法检测GBC-SD、GBC-SD/EGFP和GBC-SD/Survivin 3种细胞的增殖活性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot测各组细胞中Survivin mRNA和蛋白质水平的表达;以合适浓度的顺铂(DDP,3.0 ms/L)作用相同的时间后,
【机 构】
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430050,武汉市第五医院普外I科,华中科技大学同济医学院附属协和医院外科,430050,武汉市第五医院普外I科,华中科技大学同济医学院附属协和医院外科,华中科技大学同济医学院附属同济医院外科
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目的 观察重组质粒pEGFP-Survivin对胆囊癌细胞(GBC-SD)化疗敏感性的影响.方法 以噻唑蓝(MTT)比色法检测GBC-SD、GBC-SD/EGFP和GBC-SD/Survivin 3种细胞的增殖活性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot测各组细胞中Survivin mRNA和蛋白质水平的表达;以合适浓度的顺铂(DDP,3.0 ms/L)作用相同的时间后,用MTY法检测3种细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡,并用MIT法筛选IC_(50)值,TUNEL法观察细胞核改变;另外检测DDP作用后各组细胞的Caspase-3蛋白酶活性的变化.结果 GBC-SD和GBC-SD/EGFP细胞的增殖活性大致相同,而GBC-SD/Survivin细胞的增殖活性明显下降;RT-PCR和Western blot均发现GBC-SD/Survivin细胞中的Survivin表达水平较其余两种细胞明显下降(分别下降了74.7%和71.5%);在给予了DDP作用后,GBC-SD/Survivin细胞存活率和IC_(50)[(2.03±0.24)ms/L]明显较低,细胞凋亡率较高(84.3%),而3种细胞用TUNEL法染色后均可见棕色凋亡细胞核.给予了DDP作用后,各组细胞Caspase-3活性均呈现先升高后下降的趋势,但GBC-SD/Survivin细胞中Caspase-3的活性明显高于另外两种细胞.结论 pEGFP-Survivin表达的Survivin shRNA能明显降低GBC-sD细胞中Survivin的表达,提高对化疗药物的敏感性。
其他文献
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