【摘 要】
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目的 ·通过对已有神经诱导方法BiSF的改进,提高人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell,hiPSC)定向诱导分化为神经元的效率.方法 ·当hiPSC生长到75％融合度时启动诱导,在BiSF诱导方法的基础上加入BMP4抑制剂4-[6-(4-异丙氧基苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基]喹啉(4-[6-[4-(1-methylethoxy) phenyl] pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl] quinoline,DMH1),镜下观
【机 构】
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上海市儿童医院/上海交通大学附属儿童医院上海交通大学医学遗传研究所,上海200040;上海市儿童医院/上海交通大学附属儿童医院上海交通大学医学遗传研究所,上海200040;上海市胚胎与生殖工程重点实验
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目的 ·通过对已有神经诱导方法BiSF的改进,提高人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell,hiPSC)定向诱导分化为神经元的效率.方法 ·当hiPSC生长到75％融合度时启动诱导,在BiSF诱导方法的基础上加入BMP4抑制剂4-[6-(4-异丙氧基苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基]喹啉(4-[6-[4-(1-methylethoxy) phenyl] pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl] quinoline,DMH1),镜下观察细胞形态,实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和免疫荧光检测神经干细胞(neural stem cell,NSC)相关基因的表达,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)方法比较2种诱导方法获得细胞的增殖情况.将NSC样细胞进一步向神经元诱导分化,通过qRT-PCR及免疫荧光比较2种诱导方法的诱导效率.结果 ·镜下观察发现BiSF+DMH1诱导的第9日细胞团周围出现较多的梭形细胞,BiSF诱导的细胞出现少量梭形细胞,且细胞团灰暗不规则.CCK-8结果显示BiSF+DMH1诱导组的NSC样细胞的增殖能力在第2日开始高于BiSF诱导组(P=0.000).诱导分化第13日BiSF+DMH1组的细胞nestin、PAX6表达量高于BiSF组(P=0.019,P=0.011).免疫荧光结果显示BiSF+DMH1诱导分化组中神经元特异性标记pⅢ微管蛋白(βⅢ-tubulin)阳性的细胞比例高于BiSF诱导组(P=0.003).qRT-PCR结果证明BiSF+DMH1组MAP2的相对表达水平明显高于BiSF组(P=0.006).结论 ·DMH1能显著提高hiPSC向神经元诱导分化的效率.
其他文献
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