【摘 要】
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目的 观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)能否增强人前列腺癌细胞的体外侵袭能力,并探讨其分子机制.方法 用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达HIF-1α的抗性克隆.免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测侵袭相关蛋白E-钙黏素、
【机 构】
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710061,西安,交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,710061,西安,交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,710061,西安,交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,710061,西安,交通大学医学
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目的 观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)能否增强人前列腺癌细胞的体外侵袭能力,并探讨其分子机制.方法 用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达HIF-1α的抗性克隆.免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测侵袭相关蛋白E-钙黏素、波形纤维蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织蛋白酶D(cathepsin D)及尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)的表达,Transwell验证细胞侵袭能力.结果 与未转染细胞LNCaP相比,转染细胞LNCaP/HIF1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,E-钙黏素表达缺失,而vimentin、MMP-2、cathepsin D及uPAR表达增加.Transwell试验进一步证实,LNCaP/HIF1α穿透Matrigel滤膜的细胞数比LNCaP细胞显著增多(4.6±0.4 vs 3.2±0.3,P＜0.05).结论 HIF-1α过表达能够诱导人前列腺癌LNCaP细胞的侵袭相关蛋白表达增多,进而显著增强其体外侵袭能力。
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