结核分枝杆菌ICL mRNA特异性10-23脱氧核酶切割活性的鉴定及其切割特点

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:FJHGL
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为鉴定结核分枝杆菌异柠檬酸裂合梅(ICL)特异性的10-23DRz在无细胞体系切割ICL mRNA的活性,并探讨其在不同条件下以及联合应用时对靶mRNA的切割特点,采用计算机软件模拟ICL mRNA的二级结构,据此选择适合的待切割靶点并设计针对相应靶点的特异性10—23DRz(DZ1~DZ5).PCR法扩增获得纠基因并克隆入质粒pET32a+.采用T7 RNA聚合酶体外转录法获取ICL全长mRNA后分别用DZ1~DZ5在无细胞体系中对ICL mRNA进行切割,切割产物经变性聚丙烯酰胺凝胺电泳后用银染法鉴定
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