10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-β-O-乙酰转移酶迭代饱和突变与活性位点分析

• 作 者: 张育楠 陈天娇 朱平
• 机 构: 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生健康委员会天然产物生物合成重点实验室
• 出 处: 中国医药生物技术
• 发表日期: 2018年6期
• 关键词: 10-去乙酰巴卡亭2-10-β-O-乙酰转移酶 迭代饱和突变 高活性突变体 丙氨酸扫描 潜在活性位点 10-Deacetylbaccatin Ⅲ-10-β-O-
• 基金项目: 国家自然科学基金（81573325、31270796）,北京协和医学院“协和青年科研基金”（3332015137）,中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目（CIFMS-2017-I2M-2-004）,中央高校基本科研业务费专项资金（2017PT35001）

目的利用迭代饱和突变技术进-步提高10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-β-O-乙酰转移酶双突变体DBATG38R/F301V的活性;通过丙氨酸扫描确定DBAT活性中心的重要位点.方法利用迭代饱和突变技术在现有双突变体DBAT^G38R/F301V的基础上对Ser^396进行半饱和突变,筛选对10-去乙酰紫杉醇（DT）催化活性提高的突变体;对获得的高活性突变体蛋白进行催化DT的最适温度和最适pH测定;在最适pH条件下,将其分别用最适反应温度和0℃温育6h,考察该蛋白的热稳定性;采用生物信息学方法分析活性提高的分子机