利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库

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本文以稻瘟菌菌丝体为材料提取RNA,【目的】改进张学敏等人的方法,通过磁珠构建稻瘟菌cDNA文库,并用于下一步研究稻瘟菌与水稻之间的互作关系。【方法】通过共价键连接的寡聚oligo(dT)磁珠纯化mRNA,并以磁珠上的oligo(dT)为引物引导第一链cDNA的合成,再利用末端转移酶加尾法合成第二链cDNA。构建过程中避免使用限制酶和连接接头。【结果】用此方法构建的文库容量为8.9×10^7cfu,滴度为8.9×10^6cfu/mL,随机挑取的25个克隆插入片断平均大小达到1380bp
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