构建有序排列的除虫链霉菌基因组的柯斯文库用于工业生产菌株的遗传改造

• 作 者: 夏海洋 黄隽 胡敏杰 沈美娟 谢鹏飞 张亮 王海彬 覃重军
• 机 构: 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所合成生物学重点实验室,华中农业大学植物科学技术学院,浙江海正药业股份有限公司生物技术中心
• 出 处: 中国抗生素杂志
• 发表日期: 2009年7期
• 关键词: 除虫链霉菌 有序基因文库 基因敲除 工业菌株 Streptomyces avermitilis Ordered cosmid-library Gene kn
• 基金项目: 科技部863项目（2007AA021503）,中科院知识创新工程重要方向性项目（KSCX2-YW-G-014）,国家自然科学基金（3032500330770045,30870067）.

以容纳DNA大片段的柯斯质粒Supercos-1为载体，构建了除虫链霉菌的基因组文库。对约1000个柯斯质粒上插入片段的两端进行测序，并利用全基因组序列的信息，构建了覆盖约91％基因组的有序排列的柯斯文库。利用λ-Red高效DNA重组和大肠埃希菌．链霉菌接合转移技术，建立了除虫链霉菌的基因组遗传操作系统。运用该系统可以在除虫链霉菌工业菌株中进行高效、精确的基因敲除工作和连续的基因缺失研究，获得可以用来生产多拉菌素的工程菌株。