【摘 要】
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为获得适应于酒糟酸性环境的木聚糖酶,将内源微生物耐酸性环境的野生Bacillus velezensis P7木聚糖酶基因克隆到枯草芽孢杆菌WB800中,纯化后通过SDS-PAGE电泳显示出约40 ku的蛋白多肽.为增加枯草芽孢WB800-P7工程菌株在高密度发酵中细胞外分泌木聚糖酶的产量,进行诱导和培养条件优化,用正交试验分析得出温度对产酶影响最大,确定菌株分泌重组蛋白的条件结果表明:最佳诱导条件为OD6000.8、IPTG 1.2 mmol/L,最佳发酵条件为pH 6.0、培养温度35℃、接种量2％、摇
【机 构】
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四川轻化工大学生物工程学院,四川宜宾 644000;四川轻化工大学生物工程学院,四川宜宾 644000;四川师范大学生命科学学院,四川成都 610101
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为获得适应于酒糟酸性环境的木聚糖酶,将内源微生物耐酸性环境的野生Bacillus velezensis P7木聚糖酶基因克隆到枯草芽孢杆菌WB800中,纯化后通过SDS-PAGE电泳显示出约40 ku的蛋白多肽.为增加枯草芽孢WB800-P7工程菌株在高密度发酵中细胞外分泌木聚糖酶的产量,进行诱导和培养条件优化,用正交试验分析得出温度对产酶影响最大,确定菌株分泌重组蛋白的条件结果表明:最佳诱导条件为OD6000.8、IPTG 1.2 mmol/L,最佳发酵条件为pH 6.0、培养温度35℃、接种量2％、摇床转速160 r/min.在该条件下发酵16 h,经重复验证,酶活力达到4.21 IU,与优化前相比,酶活力提高了64.45％.并探究重组酶的耐受性,结果表明在强酸性到中性条件下(pH 5.0～7.0),其残余酶活力达到初始酶活力的80％以上.试验成功构建了木聚糖酶工程菌并较好表达蛋白,且重组木聚糖酶在酸性条件的耐受性良好.
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