【摘 要】
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目的 探究慢病毒介导shRNA质粒TRPV2和TRPV4基因双沉默模式在大鼠脊柱侧弯模型椎间盘退变中的作用.方法 本研究采用经典的双足大鼠脊柱侧弯模型构建的方法.根据siRNA干扰原理,构建shRNA-TRPV2和shRNA-TRPV4干扰载体,根据实验目的将SD大鼠分成4组,即模型组,shRNA-TRPV2组,shRNA-TRPV4组和双基因沉默组.利用X射线对上述动物模型进行摄片,利用Masson染色检测成骨组织,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞活性,利用RT-PCR检测BMP,BG
【机 构】
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冀中能源邢台矿业集团总医院骨科,河北邢台054000;邢台医学高等专科学校第二附属医院儿科,河北邢台054000
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目的 探究慢病毒介导shRNA质粒TRPV2和TRPV4基因双沉默模式在大鼠脊柱侧弯模型椎间盘退变中的作用.方法 本研究采用经典的双足大鼠脊柱侧弯模型构建的方法.根据siRNA干扰原理,构建shRNA-TRPV2和shRNA-TRPV4干扰载体,根据实验目的将SD大鼠分成4组,即模型组,shRNA-TRPV2组,shRNA-TRPV4组和双基因沉默组.利用X射线对上述动物模型进行摄片,利用Masson染色检测成骨组织,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞活性,利用RT-PCR检测BMP,BGP和ALP的mRNA表达水平.结果 shRNA-TRPV2的慢病毒转染效率较高,为(92.3±2.7)％,shRNA-TRPV4的慢病毒转染效率较高,为(91.5±3.3)％,影像摄片结果显示,双基因沉默组大鼠模型Cobb角度相较于模型组具有明显改善(P＜0.05).Masson染色结果显示,双基因沉默组大鼠模型新生成骨组织明显多于模型组(P＜0.05).TRAP染色结果显示,双基因沉默组大鼠模型破骨细胞活性及数量明显多于模型组(P＜0.05).RT-PCR结果显示,双基因沉默组大鼠模型的BMP-2,BGP和ALP的mRNA相对表达量要明显高于模型组和单基因沉默组(P＜0.05).结论 shRNA-TRPV2和shRNA-TRPV4双基因沉默可以促进骨组织的生成,促进脊柱侧弯动物模型的修复.
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