上调微小RNA-1224-5p表达对人肝癌血管内皮细胞生物学行为的影响

• 作 者: 陈麒钧 胡超 沈世强 崔忠惠 闫瑞承 李蔚
• 机 构: 430060 武汉大学人民医院肝胆外科,430060 武汉大学人民医院肝胆外科,430060 武汉大学人民医院肝胆外科,430060 武汉大学人民医院肝胆外科,430060 武汉大学人民医院肝胆外科,
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2016年33期
• 关键词: 肝细胞肝癌 肝癌血管内皮细胞 微小RNA-1224-5p

目的

观察微小RNA-1224-5p(miR-1224-5p)对人肝癌血管内皮细胞(TEC)生物学行为的影响。

方法

将合成的miR-1224-5p模拟物(mimic)通过脂质体2000转入TEC细胞中。实验分为3组：(1)上调组(miR-1224-5p mimic，MU组)；(2)阴性对照组(NC组)；(3)空白对照组(CON组)。转染后通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测3组细胞中miR-1224-5p的表达量来验证转染是否成功。分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期，Ttranswell迁移和侵袭实验检测3组细胞迁移侵袭能力的变化、血管形成实验检测3组TEC细胞的血管形成能力。

结果

RT-qPCR检测结果显示MU组中miR-1224-5p的表达量(2^－ΔΔCt＝3.27±0.15)显著高于NC组(2^－ΔΔCt＝ 1.08±0.11)和CON组(2^－ΔΔCt＝1.00)，差异有统计学意义(P<0.01)。MTT结果显示MU组细胞在转染miRNA-1224-5p mimic后的第24、48、72、96小时4个时间点均表现出吸光度值降低，与NC组及CON组比较差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测凋亡结果显示CON、NC、MU组凋亡率分别为(8.73±0.64)%、(9.51±0.56)%、(19.29±0.95)%，MU组细胞凋亡率比其他两组明显增加，差异有统计学意义(P<0.01)。而细胞周期检测结果显示CON、NC、MU组3组细胞中G₁期细胞比例分别为(50.7±1.3)%、(51.7±1.9)%、(73.3±2.0)%；S期细胞的比例为(31.4±2.7)%、(29.1±1.6)%、(23.0±3.0)%；MU组细胞中G₁期细胞比其他两组显著增加，S期细胞比其他两组显著减少，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。Transwell细胞迁移实验结果显示CON、NC、MU 3组细胞中从Ttranswell上室迁移到下室的细胞数分别为(77.7±2.5)、(79.2±3.5)、(51.0±3.6)个，与CON组和NC组比较，MU组迁移的细胞数明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell细胞侵袭实验结果显示CON、NC、MU 3组细胞中穿透Matrigel胶形成的基底膜从Ttranswell上室移动到下室的细胞数分别为(15.8±0.8)、(15.4±0.9)、(9.8±1.3)个，与CON组和NC组比较，MU组穿透基底膜的细胞数明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)。血管形成实验结果显示CON组和NC组的TEC细胞，其成管能力不受任何影响，能很好的形成血管网，而MU组的TEC细胞再也不能形成血管样结构。

结论

上调miR-1224-5p的表达可抑制TEC的增殖能力，促进TEC的凋亡并降低其迁移、侵袭及血管形成能力。