【摘 要】
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①目的探讨重组mOP-1(rmOP-1)的克隆化、原核高效表达载体的构建以及rmOP-1制备和纯化简单有效方法.②方法于胎龄为2周的CD-1小鼠胚胎组织中提取、纯化mRNA,应用ligo(dT)引物
【机 构】
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山东大学齐鲁医院泌尿外科,青岛大学医学院附属医院分子生物学实验室,青岛大学医学院附属医院泌尿外科
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①目的探讨重组mOP-1(rmOP-1)的克隆化、原核高效表达载体的构建以及rmOP-1制备和纯化简单有效方法.②方法于胎龄为2周的CD-1小鼠胚胎组织中提取、纯化mRNA,应用ligo(dT)引物反转录酶合成cDNA,PCR筛选扩增OP-1全长开放读框,产物TA克隆入质粒载体pCR 3.1-Uni;亚克隆入高效原核表达载体pTrcHis 2B,经大肠杆菌JM109、IPTG诱导表达rmOP-1蛋白;经Ni-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析.③结果限制性酶切分析、DNA测序确认mOP-1的全长开放读框
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