【摘 要】
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目的建立快速、敏感、特异的淋球菌感染实验诊断方法。方法采用溴化己二烯苯基三乙基胺-乙醇沉淀法提取淋球菌外膜蛋白复合物,以Z3,14、EDTA萃取外膜蛋白,经二乙氨基乙酸纤素
【机 构】
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武汉市皮肤病防治研究所; 华中科技大学同济医学院; 武汉市皮肤病防治研究所 430030; 430030;
【基金项目】
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湖北省武汉市科委资助课题(986002056)
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目的建立快速、敏感、特异的淋球菌感染实验诊断方法。方法采用溴化己二烯苯基三乙基胺-乙醇沉淀法提取淋球菌外膜蛋白复合物,以Z3,14、EDTA萃取外膜蛋白,经二乙氨基乙酸纤素-SepharoseCL-6B层析纯化获得主要外膜蛋白(PⅠ),并按免疫杂交瘤技术建立分泌抗PⅠ单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。结果获得了WⅠ群淋球菌的PⅠA和WⅡ/WⅢ群淋球菌的PⅠB,SDS鄄PAGE测得PⅠA的分子量为35200,PⅠB的分子量为36700。建立了可持续、稳定分泌抗PⅠAMcAb的杂交瘤细胞2株和抗PⅠBMcAb的杂交瘤细胞3株。5株杂交瘤细胞培养上清液的抗体滴度为1∶64～1∶256,其诱生的BALB/c小鼠腹水中的抗体滴度为1∶4096～1∶16384,与淋球菌呈高效价反应,与脑膜炎双球菌等其他抗原不发生反应。结论获得的高纯度PⅠ及其McAb为建立快速、敏感、特异的淋球菌感染实验诊断方法奠定了基础。
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