【摘 要】
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目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定.方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
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目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定.方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因.将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E. coli B121感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化.通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析.结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达.表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性.
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