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摘 要：目的：利用高效液相色谱法对阿奇霉素含量进行测定。方法：测定固定相拟用日本岛津CLC-CN柱，而流动相拟用0.1mol.L磷酸二氢钠-甲醛-乙腈，将其放在pH3.0-pH3.5溶液中，每分钟的流速为1mL，柱的温度控制在40摄氏度，将紫外检测波控制在210nm，在灵敏度0.08AUFS条件下对阿奇霉素进行测定，最后再认证该试验方法的可行性。结果：经过测定得出阿奇霉素能够和成分中的杂质完全分离，在100mg-1000mg.L这个范围之内，其浓度a和峰面积之间有着良好的线性关系，即r=0.9996。得出的阿奇霉素评论回收率则是100.3%，其中日内RSD的取值在0.35%到0.39%范围内，而日间RSD的取值在0.35%到4.40%范围内，重复进样精度RSD要控制到2%以下，但是在pH3.0-pH3.5之间的溶液和3%的双氧水溶液中，12个小时之内阿奇霉素含量是恒定不变的。结论：该测定方法比较简单，测定效率较快，又有很高的灵敏度和重现性，能很好地对阿奇霉素含量进行测定，此方法值得推广应用。
关键词：高效液相色谱；阿奇霉素；测定；含量
阿奇霉素是一种半合成大环内酯抗生素，其内部含有15元氮杂内酯环，在美国药典以及中国药典都被收录和记载。分析阿奇霉素含量的时候，中国药典所采用的分析方法是微生物方法，而美国药典所采用的分析方法则是反相氧化铝柱以及安培电化学检测器这两种方法。在本文主要依据阿奇霉素的特有性质，采用了CN柱分离测定法，主要的原理就是高效液相色谱紫外检测法对药物含量进行测定，分离效果也非常好，这种方法测量出来的结果有较高的准确性，成为药物原料测定以及制剂测定有效的手段，在有较高的应用价值。
一、仪器与试剂
高效液相色谱仪，包括LC- 10Avp高压泵，SPD- 10Avp紫外检测器，DGU- 12A在线脱气机，CTO- 6A柱恒温箱，C- R3A色谱积分仪（日本岛津）；阿奇霉素标准品（浙江省药品检验所，批号980615，每1 mg的效价为918 U的阿奇霉素，即为98.00%）；注射用门冬氨酸阿奇霉素冻干粉剂（海南斯达制药有限公司，批号20001209）；注射用硫酸阿奇霉素冻干粉剂（浙江尖峰药业有限公司，批号020508）；甲醇及乙腈均为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯，水为纯化水。
二、方法和结果
1、选择检测波长。在紫外扫描的时候，要在波长190nm-350nm范围内进行，当阿奇霉素处在280nm的时候吸收最大，相应的响应值则是比较小的。当阿奇霉素处在210nm的时候吸收是最有易于吸收到最大值的，要想将敏感度提高上来，就应该将检测波长选择为210nm，这样有益于检测结果的精确度。
2、选择流动相。在检测吸收时是应用的紫外末端，要想将基线噪音控制到最低，并抬高本地，就要控制流动相中的乙腈和甲醇的混合比例，不能让其超过20%，应用CLC-CN的时候，流动相时磷酸二氢钠-甲醛-乙腈，经过系统的筛选确定磷酸二氢钠-甲醛-乙腈系统分离效果最好的pH值范围区间为pH3.0-pH3.5之间，而且基线足够平稳，同时谱峰也是最尖锐的，所以流动相要选定为磷酸二氢钠-甲醛-乙腈。
3、色谱条件和系统适应性。日本岛津CLC-CN柱（5μm，150 mm× 6.0 mm ID），流动相：0.1 mol？L- 1磷酸氢二钠-甲醇-乙腈（85∶7∶8），pH3.0～ 3.5，流速：1 mL·min- 1，柱温：40℃ ，检测波长：210 nm，灵敏度：0.08 AUFS；外标法。理论塔板數按阿奇霉素峰计算应不低于1 000，标准色谱见图1。
4、对照品溶液及供试品溶液的制备。（1）对照品溶液的制备。精密称取阿奇霉素标准品25 mg，置25 mL的量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，使其浓度为1 g？L- 1标准储备液，备用。（2）供试品溶液的制备。分别精密称取注射用门冬氨酸阿奇霉素、注射用硫酸阿奇霉素阿奇霉素计算各50 mg，分别置25 mL量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，即成2 g？L- 1供试品浓溶液；再精密吸取浓溶液适量，分别稀释成600，800 mg？L- 1的供试品测定溶液，供直接进样分析。
5、回收率与精密度。配制100，600，1 000 mg？L- 13种浓度的平行管各3份，同一天内分别进样测定，计算加样回收率和日内RSD。同时，在不同天内分别配制不同浓度的样品，分别进样测定，计算日间RSD，结果见表1。
6、稳定性考察。（1）时间稳定性测试。取800 mg·L- 1对照品溶液在0，3，5，7，12，24 h进行试验，阿奇霉素峰的峰面积的RSD为0.37%（n= 6），表明该溶液稳定。（2）不同介质中分解产物的测试。取浓度为1 g·L- 1标准储备液，分别用0.1 mol·L- 1氢氧化钠溶液、0.1 mol·L- 1盐酸溶液稀释成600 mg·L- 1，再用盐酸和氢氧化钠溶液调节pH为2.0，3.0，5.0，7.0，9.0， 12.0共6份测试溶液，另再用3%双氧水稀释成600 mg·L- 1测试液1份，于上述时间分别进样，作为碱性介质、酸性介质和氧化性介质中的分解产物分析测试。结果显示阿奇霉素在上述不同介质中长时间放置均有不同程度的降解，4 h前含量保持不变，12 h后在pH 9的碱性介质和3%双氧水中含量可保持在95%以上，而pH 2的酸性介质溶液中有明显的分解产物产生，含量下降了70%；24 h在pH9的溶液中含量基本保持不变，3%双氧水中含量仍保持在90以上，酸性介质中含量则只有原来的15%左右；在pH12以上的碱性环境中12 h时含量下降了30%，24 h时则下降50%。
三、讨论
1、选择分析柱。国内外在报报道HPLC测定阿奇霉素的过程中，通常情况下，是用C18柱作为分离，在本次的研究试验中，对阿奇霉素的分析是采用CN柱，并取得满足的实验测试结果。通过与文献的对比可知，C18柱分离过程中，洗脱阿奇霉素的流动相中，有机溶剂的使用比例比CN柱的使用比例比较高，有的柱的温度已经达到50℃，这样的话，柱损伤是很容易发生的；
2、流动相配比对色谱分离的影响。在检测波长的设置过程中采用的是紫外末端吸收，因此在流动相中，有机溶剂的含量需要得到有效的控制，如果有机相的的含量在20%，那么基线噪音就会明显的增加，并且斜率的波动比较大。在本实验中，流动相的配置原本使用的都是甲醇，但是并没有获得理想的鲜果。而当甲醇含量降低，增加乙腈的使用量，当控制甲醇在7%和乙腈为8%的混合比例的状态下，获得了较好的效果。这个时候具有较好的峰形，主峰会与分解物所产生的色谱峰呈现分离的状态，并且出峰的时间较为理想，具有较快的分析速度，在多次进样的基础上，呈现较好的重复性。因此分析流动相的确定为该配比。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京：中国医药科技出版社，2010：1029.
[2]刘海英，杨宁，黄力，等.高效液相色谱法测定氯霉素醇溶液中氯霉素的含量[J].药学实践杂志，2008，26（4）：289-293.
[3]郭胜才，谷娜，李华.高效液相色谱法测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸与氯霉素含量[J].医药导报，2010，29（6）：783-785.
[4]刘媛，黄敬群，张亮.改进的高效液相色谱法测定氯霉素滴耳液中氯霉素含量[J].华北国防医药，2009，21（6）：26-27.
关键词：高效液相色谱；阿奇霉素；测定；含量
阿奇霉素是一种半合成大环内酯抗生素，其内部含有15元氮杂内酯环，在美国药典以及中国药典都被收录和记载。分析阿奇霉素含量的时候，中国药典所采用的分析方法是微生物方法，而美国药典所采用的分析方法则是反相氧化铝柱以及安培电化学检测器这两种方法。在本文主要依据阿奇霉素的特有性质，采用了CN柱分离测定法，主要的原理就是高效液相色谱紫外检测法对药物含量进行测定，分离效果也非常好，这种方法测量出来的结果有较高的准确性，成为药物原料测定以及制剂测定有效的手段，在有较高的应用价值。
一、仪器与试剂
高效液相色谱仪，包括LC- 10Avp高压泵，SPD- 10Avp紫外检测器，DGU- 12A在线脱气机，CTO- 6A柱恒温箱，C- R3A色谱积分仪（日本岛津）；阿奇霉素标准品（浙江省药品检验所，批号980615，每1 mg的效价为918 U的阿奇霉素，即为98.00%）；注射用门冬氨酸阿奇霉素冻干粉剂（海南斯达制药有限公司，批号20001209）；注射用硫酸阿奇霉素冻干粉剂（浙江尖峰药业有限公司，批号020508）；甲醇及乙腈均为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯，水为纯化水。
二、方法和结果
1、选择检测波长。在紫外扫描的时候，要在波长190nm-350nm范围内进行，当阿奇霉素处在280nm的时候吸收最大，相应的响应值则是比较小的。当阿奇霉素处在210nm的时候吸收是最有易于吸收到最大值的，要想将敏感度提高上来，就应该将检测波长选择为210nm，这样有益于检测结果的精确度。
2、选择流动相。在检测吸收时是应用的紫外末端，要想将基线噪音控制到最低，并抬高本地，就要控制流动相中的乙腈和甲醇的混合比例，不能让其超过20%，应用CLC-CN的时候，流动相时磷酸二氢钠-甲醛-乙腈，经过系统的筛选确定磷酸二氢钠-甲醛-乙腈系统分离效果最好的pH值范围区间为pH3.0-pH3.5之间，而且基线足够平稳，同时谱峰也是最尖锐的，所以流动相要选定为磷酸二氢钠-甲醛-乙腈。
3、色谱条件和系统适应性。日本岛津CLC-CN柱（5μm，150 mm× 6.0 mm ID），流动相：0.1 mol？L- 1磷酸氢二钠-甲醇-乙腈（85∶7∶8），pH3.0～ 3.5，流速：1 mL·min- 1，柱温：40℃ ，检测波长：210 nm，灵敏度：0.08 AUFS；外标法。理论塔板數按阿奇霉素峰计算应不低于1 000，标准色谱见图1。
4、对照品溶液及供试品溶液的制备。（1）对照品溶液的制备。精密称取阿奇霉素标准品25 mg，置25 mL的量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，使其浓度为1 g？L- 1标准储备液，备用。（2）供试品溶液的制备。分别精密称取注射用门冬氨酸阿奇霉素、注射用硫酸阿奇霉素阿奇霉素计算各50 mg，分别置25 mL量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，即成2 g？L- 1供试品浓溶液；再精密吸取浓溶液适量，分别稀释成600，800 mg？L- 1的供试品测定溶液，供直接进样分析。
5、回收率与精密度。配制100，600，1 000 mg？L- 13种浓度的平行管各3份，同一天内分别进样测定，计算加样回收率和日内RSD。同时，在不同天内分别配制不同浓度的样品，分别进样测定，计算日间RSD，结果见表1。
6、稳定性考察。（1）时间稳定性测试。取800 mg·L- 1对照品溶液在0，3，5，7，12，24 h进行试验，阿奇霉素峰的峰面积的RSD为0.37%（n= 6），表明该溶液稳定。（2）不同介质中分解产物的测试。取浓度为1 g·L- 1标准储备液，分别用0.1 mol·L- 1氢氧化钠溶液、0.1 mol·L- 1盐酸溶液稀释成600 mg·L- 1，再用盐酸和氢氧化钠溶液调节pH为2.0，3.0，5.0，7.0，9.0， 12.0共6份测试溶液，另再用3%双氧水稀释成600 mg·L- 1测试液1份，于上述时间分别进样，作为碱性介质、酸性介质和氧化性介质中的分解产物分析测试。结果显示阿奇霉素在上述不同介质中长时间放置均有不同程度的降解，4 h前含量保持不变，12 h后在pH 9的碱性介质和3%双氧水中含量可保持在95%以上，而pH 2的酸性介质溶液中有明显的分解产物产生，含量下降了70%；24 h在pH9的溶液中含量基本保持不变，3%双氧水中含量仍保持在90以上，酸性介质中含量则只有原来的15%左右；在pH12以上的碱性环境中12 h时含量下降了30%，24 h时则下降50%。
三、讨论
1、选择分析柱。国内外在报报道HPLC测定阿奇霉素的过程中，通常情况下，是用C18柱作为分离，在本次的研究试验中，对阿奇霉素的分析是采用CN柱，并取得满足的实验测试结果。通过与文献的对比可知，C18柱分离过程中，洗脱阿奇霉素的流动相中，有机溶剂的使用比例比CN柱的使用比例比较高，有的柱的温度已经达到50℃，这样的话，柱损伤是很容易发生的；
2、流动相配比对色谱分离的影响。在检测波长的设置过程中采用的是紫外末端吸收，因此在流动相中，有机溶剂的含量需要得到有效的控制，如果有机相的的含量在20%，那么基线噪音就会明显的增加，并且斜率的波动比较大。在本实验中，流动相的配置原本使用的都是甲醇，但是并没有获得理想的鲜果。而当甲醇含量降低，增加乙腈的使用量，当控制甲醇在7%和乙腈为8%的混合比例的状态下，获得了较好的效果。这个时候具有较好的峰形，主峰会与分解物所产生的色谱峰呈现分离的状态，并且出峰的时间较为理想，具有较快的分析速度，在多次进样的基础上，呈现较好的重复性。因此分析流动相的确定为该配比。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京：中国医药科技出版社，2010：1029.
[2]刘海英，杨宁，黄力，等.高效液相色谱法测定氯霉素醇溶液中氯霉素的含量[J].药学实践杂志，2008，26（4）：289-293.
[3]郭胜才，谷娜，李华.高效液相色谱法测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸与氯霉素含量[J].医药导报，2010，29（6）：783-785.
[4]刘媛，黄敬群，张亮.改进的高效液相色谱法测定氯霉素滴耳液中氯霉素含量[J].华北国防医药，2009，21（6）：26-27.