胞苷磷酸激酶基因的克隆与原核表达

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目的:克隆胞苷磷酸激酶(CMPK)基因,构建携带CMPK基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的重组CMPK融合蛋白,获得转基因工程菌。方法:利用PCR法扩增大肠杆菌基因组DNA,纯化的PCR产物链接至pMD18-T载体上,得到重组质粒pMD18-T-CMPK,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,酶切鉴定;分别用BamH I和XhoI限制性内切酶双酶切重组质粒pMD18-T-CMPK和pET28a(+)表达载体,连接后,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,酶切鉴定。用终浓度1 mmo
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