【摘 要】
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目的: 通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体.方法: 从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA, 用一对特异性引物通过RT-PCR扩
【机 构】
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苏州大学医学生物技术研究所,江苏省医学临床免疫学重点实验室,江苏,苏州,215007
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目的: 通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体.方法: 从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA, 用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAb VH和VL的DNA编码区基因.根据序列分析的结果, 设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.利用基因重组技术, 将mAb 5C11的VH、 VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、 Cκ链基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11.用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达.利用流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI基因数据库Blast的结果显示, 克隆的基因序列符合小鼠VH、 VL基因及其信号肽序列的特征.表达质粒pIRES/h5C11的构建正确, 并在293T细胞株中获得瞬时表达.表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb 5C11具有相同的抗原结合位点.结论: 成功地克隆了鼠抗人CD40 mAb V区编码基因, 并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达.
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