萝卜叶绿体rbc L基因定位及ctDNA基因文库的构建

来源 :武汉大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:YUZHOU2010
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用改进的高离子强度法分离的萝卜叶绿体(ct)经SDS60℃裂解,抽提的ctDNA只需简单纯化即可用于酶切分析.萝卜ctDNA用4种限制性内切酶BamHⅠ,PstⅠ,HindⅢ和EcoRⅠ分别进行单酶完全酶解,推算其分子量和长度分别为82.5×106和125kb.以Nicktranslation标记的异源探针rbcL基因与ctDNAEcoRⅠ片段进行杂交,初步定位在E11片段(1.7kb)上.以BluescriptM13为载体构建了萝卜ctDNAEcoRⅠ基因文库 The radish chloroplast (ct) isolated by the improved high ionic strength method was cleaved by SDS at 60 ℃. The extracted ctDNA could be used for digestion analysis with simple purification. The radish ctDNA was completely digested with four restriction enzymes BamHⅠ, PstⅠ, HindⅢ and EcoRⅠ, respectively, and the molecular weight and length of radish were estimated to be 82.5 × 106 and 125kb, respectively. Nicktranslation labeled heterologous probe rbcL gene and ctDNAEcoRI fragment hybridization, the initial positioning in the E11 fragment (1.7kb). The cDNA library of radish ctDNAEcoRI was constructed with Bluescript M13 as a vector
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