【摘 要】
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目的探讨异紫堇碱（ICD）对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。方法采用不同浓度（25、50、100、200 μmol/L）ICD处理宫颈癌SiHa细胞（简称ICD处理组），同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照（NC）组。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测细胞的增殖抑制率，细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响，
【机 构】
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目的探讨异紫堇碱（ICD）对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。
方法采用不同浓度（25、50、100、200 μmol/L）ICD处理宫颈癌SiHa细胞（简称ICD处理组），同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照（NC）组。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测细胞的增殖抑制率，细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响，Western blot检测磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的相对表达量，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的表达。在SiHa细胞中分别转染miR-NC和miR-129-5p，观察转染miR-129-5p对细胞增殖、辐射敏感性、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、γ-H2AX蛋白表达的影响。在SiHa细胞中分别转染anti-miR-NC和anti-miR-129-5p并使用ICD处理，分析其对ICD诱导的细胞增殖、辐射敏感性、PI3K/Akt信号通路的影响。2组间数据的比较采用独立样本t检验。
结果MTT实验结果显示，与NC组SiHa细胞的增殖抑制率[（0.05±0.01）%]相比，25、50、100、200 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（10.26±1.03）%、（22.16±2.21）%、（44.09±4.41）%、（70.88±7.09）%]，且差异均有统计学意义（t=29.736~30.013，均P<0.05）。细胞克隆形成实验、Western blot和qRT-PCR结果显示，与NC组相比，100 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=19.135~44.478，均P<0.05），提高γ-H2AX蛋白和miR-129-5p的相对表达量（t=15.041、19.682，均P<0.05），降低p-PI3K和p-Akt蛋白的相对表达量（t=14.897、15.429，均P<0.05）。与转染miR-NC组相比，转染（高表达）miR-129-5p组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（75.06±7.51）%对（1.04±0.10）%，t=29.566，P<0.05]、对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=13.239~37.015，均P<0.05）和γ-H2AX蛋白的相对表达量（t=17.076，P<0.05），能够降低cyclinD1蛋白的相对表达量（t=17.393，P<0.05）。与转染anti-miR-NC+ICD处理组相比，转染anti-miR-129-5p（低表达miR-129-5p）+ICD处理组可以反转ICD抑制SiHa细胞增殖、抑制PI3K/Akt信号通路的活性和增强细胞辐射敏感性的作用，且差异均有统计学意义（t=13.370~28.252，均P<0.05）。
结论ICD能够通过上调miR-129-5p表达及抑制PI3K/Akt信号通路的活性来抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖以及增强其辐射敏感性。
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