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目的：应用分子生物学的方法,在细胞水平观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导培养下的乳鼠心脏成纤维细胞(Cardiac Fibroblasts,CFs)表型转化的影响,以及TGF-β1-TAK1-p38MAPK信号通路在其中的作用。方法：1、原代细胞培养：体外分离、培养乳鼠CFs细胞,取1-3天内SD大鼠乳鼠的心室肌,经消化、过滤、差速贴壁纯化得到贴壁较早的乳鼠心脏成纤维细胞,经传代培养后,使用生长良好的第2代细胞。2、药物干预：用10-6mol/L的Ang Ⅱ诱导CFs细胞表型转化,加入20U/ml的EPO和／或15umol/L的SB203580对CFs细胞进行干预,进而将同一批细胞随机分为五组：空白组、Ang Ⅱ组、EPO组、Ang Ⅱ+EPO组、Ang Ⅱ+EPO+SB203580组。3、免疫细胞化学法检测纤维化指标α-SMA的表达：CFs细胞爬片后,使用药物干预后,以平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, a-SMA)蛋白表达做为CFs纤维化的观察指标,应用免疫细胞化学法观察CFs细胞内a-SMA蛋白表达情况,观察各组a-SMA蛋白表达的差异。4、采用RT-PCR方法检测细胞内信号分子表达情况：分别提取不同药物处理组细胞的总RNA,反转录为cDNA,应用实时荧光定量PCR的方法分别对转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)及P38丝裂原活化蛋白激酶P38MAPK的mRNA转录水平进行分析。5、采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测信号分子蛋白表达：分别提取不同药物干预组细胞的总蛋白,经纯化、电泳、转膜、抗体孵育、曝光及显影、定影后,对a-SMA蛋白、TGF-β1、转化生长因子β激活性激酶1(TGF-β-activated kinase, TAK1)、P38MAPK以及p-TAKl和p-P38MAPK的蛋白的相对表达量进行分析。结果：1、原代培养的CFs:心脏CFs生长较心肌细胞迅速,原代分离心肌细胞和成纤维细胞后3-5d,CFs即可达80%～90%融合状态。CFs呈长梭形,胞体较大,胞浆透明,胞核1-2个,无自发搏动。2、免疫细胞化学法检测胞内纤维化标志蛋白α-SMA表达：10-mol/L的AngⅡ能诱导CFs内α-SMA蛋白的表达增加,并且20U/ml的EPO能有效减少AngⅡ诱导的CFs细胞内α-SMA蛋白的沉积,而加入特异性抑制剂SB203580后与仅加入EPO作用效果相似。3、RT-PCR结果提示：20U/ml的EPO能够降低CFs表型转化相关信号分子TGF-β1及P38MAPK的核酸水平的表达,且加入P38MAPK信号蛋白特异性抑制剂SB203580后,该抑制作用增强。4、Western blot结果发现：20U/ml的EPO能够降低CFs表型转化相关信号分子TGF-β1、p-TAK1、TAK1、 p-P38MAPK和P38MAPK的磷酸化或表达,且加入P38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580后,该抑制作用明显增强。结论：1、AngⅡ能有效的诱导CFs表型转化,能够模拟心肌梗死后心室重构的过程,能够作为EPO抗乳鼠心肌纤维化研究的细胞平台。2、EPO能够抑制Ang II诱导的CFs转换为myoFb,抑制心肌纤维化,减少TGF-β1-TAK1-p38MAPK信号通路相关信号分子的表达,初步表明了EPO的抗心肌纤维化、抑制心室重构的心脏保护作用可能是通过TGF-β1-TAK1-p38MAPK信号通路进行的。