【摘 要】
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目的 分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因.方法 采用SMART技术构建IRM-2小鼠全长cDNA文库,提取雄性IRM-2小鼠脾脏总RNA,以此为模板,通过逆转录酶PowerScript反转录合成第1
【机 构】
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中国医学科学院放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室
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目的 分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因.方法 采用SMART技术构建IRM-2小鼠全长cDNA文库,提取雄性IRM-2小鼠脾脏总RNA,以此为模板,通过逆转录酶PowerScript反转录合成第1链cDNA,通过长距离PCR合成并扩增双链cDNA.该扩增产物经纯化、Sfi I酶切、去除小于500 bp片段后,将cDNA连接到sfi I消化过的PDNR-LIB质粒载体中,用电转化法将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α,得到IRM-2小鼠cDNA原始文库并用PCR法对文库的质量进行鉴定.随机从cDNA文库挑选130个阳性克隆进行测序,与GenBank基因库进行同源性比较.结果 构建的cDNA文库的容量为2.25×106个克隆,重组率达95%,平均插入片段长度约1.2 kb,全长基因比例为55%.从cDNA文库挑选的阳性克隆中有21条EST序列与小鼠已知基因不同源,在GenBank的EST数据库的注册号为DW474856～DW474876.结论 成功构建了IRM-2小鼠全长cDNA文库,21条EST提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础.
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