【摘 要】
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目的研究PI3K p55γ调节亚基N末端氨基酸过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231黏附性的影响,探讨其作用的分子机制。方法通过脂质体介导用重组质粒p EGFPN24瞬时转染MDA-MB-231细胞
【机 构】
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齐齐哈尔医学院临床生化教研室,齐齐哈尔医学院生化教研室,
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目的研究PI3K p55γ调节亚基N末端氨基酸过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231黏附性的影响,探讨其作用的分子机制。方法通过脂质体介导用重组质粒p EGFPN24瞬时转染MDA-MB-231细胞系。荧光显微镜和免疫印迹方法鉴定转染细胞中绿色荧光蛋白(GFP)以及融合蛋白GFP-N24的表达,细胞黏附实验检测细胞在胶原和纤黏连蛋白上的黏附性。免疫印迹实验检测细胞内源性E-钙黏素(E-cadherin)和磷酸化Akt(p Akt)的表达。酶谱实验检测基质金属蛋白酶9(MMP9)和尿激酶型纤维酶原活化因子(u PA)的表达与分泌。结果荧光显微镜下可见转染细胞因外源基因的表达而发出绿色荧光,胞浆分泌颗粒明显增加。免疫印迹结果显示,融合蛋白GFP-N24的表达量略低于空载体中GFP的表达量。过表达N24p55γ的细胞在纤黏连蛋白和胶原上的黏附性明显下降。细胞内源性PI3K下游信号分子磷酸化Akt的表达量下降,但N24p55γ的过表达不影响转染细胞中细胞黏附分子E-cadherin的表达。此外,N24p55γ的过表达抑制肿瘤转移相关基因MMP9的活化与u PA的分泌。结论 PI3K p55γN末端氨基酸过表达可能通过影响PI3K/Akt信号通路以及肿瘤转移相关基因MMP9和u PA的表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附性。
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