【摘 要】
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通过构建稳定表达VapA蛋白的J774A.1巨噬细胞系,探究马红球菌VapA蛋白对巨噬细胞自噬的影响。构建vapA基因的重组慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-vapA,将其转染J774A.1细胞
【机 构】
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宁夏大学生命科学学院,宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31760035,31960694),宁夏高等学校一流学科建设(生物学)资助项目(NXYLXK2017B05)。
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通过构建稳定表达VapA蛋白的J774A.1巨噬细胞系,探究马红球菌VapA蛋白对巨噬细胞自噬的影响。构建vapA基因的重组慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-vapA,将其转染J774A.1细胞,经过嘌呤霉素筛选重组细胞,利用RT-PCR、Western-blot和免疫荧光鉴定重组细胞系中VapA蛋白的表达;利用RT-PCR检测自噬相关基因LC3-Ⅱ、p62、Beclin1、Atg5及Atg7的表达情况,明确VapA蛋白对巨噬细胞自噬的影响。结果显示,本研究成功构建了稳定表达VapA蛋
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