【摘 要】
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为了提高体细胞核移植生产转基因克隆山羊的效率,本研究针对2次克隆转基因山羊的重构胚发育情况进行了比较分析.首先,剖宫产从35日龄奶山羊胎儿中分离培养原代胎儿成纤维细胞
【机 构】
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无锡太湖学院护理学院,江苏无锡214000;江苏食品药品职业技术学院,制药工程学院,江苏淮安223003;扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心,江苏扬州225009
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为了提高体细胞核移植生产转基因克隆山羊的效率,本研究针对2次克隆转基因山羊的重构胚发育情况进行了比较分析.首先,剖宫产从35日龄奶山羊胎儿中分离培养原代胎儿成纤维细胞,分别电转染BLYZ和Blac乳腺特异性表达载体,500 mg/L G418筛选、PCR检测以获得转基因细胞株.然后,以此转基因细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植.最后,剖宫产获取转基因胎儿克隆细胞系,以此作为供核细胞进行2次克隆生产转基因山羊,并比较分析重构胚发育情况.结果显示:共获得74株LYZ转基因细胞,62株hα-LA转基因细胞;通过第1轮体细胞核移植后,BLYZ和Blac栽体的重构卵融合率分别为79.4％(235/296),77.0％(221/287),2?4细胞发育率分别为35.7％(84/235)和33.0％(73/221),移植受体妊娠率分别为38.5％(5/13)和36.4％(4/11);2次克隆后,BLYZ和Blac载体的重构卵融合率分别为90.1％(118/131),87.6％(127/145),2～4细胞发育率分别为66.9％(79/118)和68.5％(87/127),移植受体妊娠率分别为58.3％(7/12)和61.5％(8/13).以上结果表明,2次克隆的转基因山羊重构胚融合率、发育率和移植受体妊娠率均明显高于传统的体细胞核移植,这为今后高效生产转基因山羊和转基因动物的遗传育种奠定基础.
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