【摘 要】
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目的 观察人胆管癌细胞来源的exosome及exosome裂解超滤液(UEL)对树突状细胞/细胞毒性T淋巴细胞诱导(DC/CTL)混合细胞抗肿瘤活性的影响及机制.方法 采用超速离心法提取人胆管癌细胞(RBE细胞)释放的exosome,低渗法裂解exosome,超滤法去除exosome来源微小RNA(exosomal miRNA)并提纯exosome裂解超滤液.将exosome及其裂解超滤液分别负载
【机 构】
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310006杭州,浙江大学医学院附属第二医院肝胆胰外科,310006杭州,浙江大学医学院附属第二医院肝胆胰外科,310006杭州,浙江大学医学院附属第二医院肝胆胰外科,310006杭州,浙江大学医学院
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目的 观察人胆管癌细胞来源的exosome及exosome裂解超滤液(UEL)对树突状细胞/细胞毒性T淋巴细胞诱导(DC/CTL)混合细胞抗肿瘤活性的影响及机制.方法 采用超速离心法提取人胆管癌细胞(RBE细胞)释放的exosome,低渗法裂解exosome,超滤法去除exosome来源微小RNA(exosomal miRNA)并提纯exosome裂解超滤液.将exosome及其裂解超滤液分别负载到人外周血来源的未成熟树突状细胞(imDC)上并与CTL共培养,ELISA法检测各组培养液上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和穿孔素蛋白的浓度,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测DC/CTL混合细胞对RBE细胞的杀伤活性.结果 E-DC/CTL、DC/CTL、EL-DC/CTL组平均TNF-α浓度分别为138.61、194.08、210.87 ng/L；穿孔素蛋白平均浓度分别为2.41、3.39、3.79 μg/L,E-DC/CTL组低于DC/CTL组(P＜0.05),EL-DC/CTL组与DC/CTL组差异无统计学意义(P＞0.05).3组对RBE的杀伤率分别为33.35％、47.35％、66.23％,3组之间杀伤率差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 胆管癌exosome通过下调CTL的TNF-α和穿孔素的表达而导致DC/CTL抗肿瘤活性下降,其机制可能与exosomal miRNA有关；我们建立了一种基于exosome裂解超滤液的DC/CTL诱导模型,其对胆管癌细胞的杀伤活性显著增强。
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