CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建

• 作 者: 赵永攀 石磊 李晋 李晓泽 李健 赵树进
• 机 构: 广州军区广州总医院药剂科,广东 广州 510010;华南理工大学生物科学与工程学院,广东 广州 510640
• 出 处: 2016年广东省药师周大会
• 发表日期: 2015年3期
• 关键词: β-actin基因 CYP4F2基因 实时荧光定量PCR 重组质粒

目的：制备用于CYP4F2和β-actin基因mRNA实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测的标准品质粒与标准曲线.
方法：通过PCR扩增出CYP4F2和β-actin目的片断,纯化后直接连接于pGEM-Teasy载体,转化E·coli DH5α宿主菌,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.
结果：CYP4F2和β-actin基因目的片段均成功重组,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的Real-time PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.
结论：成功构建了CYP4F2和β-actin基因实时Real-time PCR标准品质粒和标准曲线.