【摘 要】
：
本试验旨在构建能表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的重组质粒。用疑似患猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病猪的脾脏、肺脏病料提取RNA,根据PRRSVORF5基因设计1对引物,进
【基金项目】
：
云南省重点新产品开发(2014BB04);云南省院士专家工作站建设项目(2014IC034)
论文部分内容阅读
本试验旨在构建能表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的重组质粒。用疑似患猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病猪的脾脏、肺脏病料提取RNA,根据PRRSVORF5基因设计1对引物,进行RT-PCR扩增,将ORF5目的基因克隆到pMD19-T载体中,得到pMD19-ORF5重组菌。根据测序结果和表达载体特点,设计1对带有NcoⅠ和XbaⅠ酶切位点的引物,扩增目的片段(dORF5),将其分别与pProEXHTb载体、pNZ8149载体连接,得到HTb-dORF5/DE3和pNZ8149-dORF5/NZ3900重组菌,分别用IPTG和Nisin诱导,再进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显示,HTb-dORF5/DE3重组菌在1.5mmol/L IPTG诱导时表达量最高,通过SDSPAGE和Western blotting分析,在约22ku处有特异性条带,且具有反应原性;pNZ8149-dORF5/NZ3900重组菌在20ng/mL Nisin诱导时表达量最高,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,在约19ku处有特异性条带,间接免疫荧光试验有特异性绿色荧光。本研究成功构建重组质粒HTb-dORF5和pNZ8149-dORF5并获得表达,这为进一步研制预防PRRS疫苗奠定坚实基础。
其他文献
身处清末民初的萧友梅,将自身人生志向始终定位于音乐与教育,在留日、留德的10余年中,对中西两种音乐教育体制有深刻的洞察和体悟。归国后,按照其"借鉴西乐,改良旧乐,创造新
笔者回顾了内蒙古草原保护与建设的历史，对古代内蒙古草原——史前内蒙古草原、古代草原保护律令、内蒙古草原历次大开垦以及内蒙古人民反垦、抗垦武装斗争进行了简要概述。简
"镶嵌式自主"对分析和考察城中村改造中政府、村集体和村民的自主与镶嵌关系是一个有价值的概念。政府、村集体和村民在城中村改造活动中的行为表现出自主性和镶嵌性并存的特
工程质量问题具有隐蔽性及突发性特点,已有的质量管理研究往往从管理者的视角探讨质量管理思想或方法,鲜有从工程项目自身质量特征入手,将工程项目视为有机系统进行研究。受
<正> 第二次世界大战后期,英美盟军在西欧开辟了反对法西斯德国的新战场,史称“第二战场”。第二战场是反法西斯战争中的一个重要战场,它发挥了诸方面的积极作用,这都为国内
儿童过敏性咳嗽的病因病机至今尚未形成统一的观点。现代医家在临床实践中发现,从肝肺论治过敏性咳嗽疗效显著,具体包括平肝降肺、疏肝润肺、清肝肃肺、调整阴阳等。小儿"肝
从中国钼工业经济运行情况、产业结构、市场及对外贸易情况等几个方面,阐述了中国钼工业发展现状,并对中国钼工业经济运行状况进行了分析,指出了中国钼工业发展中的突出问题,
出于保护未成年人的特殊考虑,美国在国家本位阶段、言论自由独立性价值兴起阶段和社会价值及个体性价值博弈阶段于色情淫秽问题上呈现出了不同的道德实践和价值取向,这反映出
产业集群是改革开放后我国经济增长的一个鲜明特色。经典理论主要从技术角度关注产业集群给集群内企业所带来的三大优势:临近市场,共享劳动力资源,以及促进技术传播。在本文
目的：建立大鼠胶原诱导型关节炎(Collagen-induced arthritis, CIA)模型,以离子型谷氨酸受体为研究靶点,分别应用受体拮抗剂MK-801及NBQX,观察不同受体拮抗剂对大鼠行为学的影