【摘 要】
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目的探讨坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)对神经元突起生长的作用。方法构建CRMP5真核表达载体,采用基因转染、实时定量PCR和免疫印迹技术评估CRMP5基因表达;以空载体为对照组,设3
【机 构】
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暨南大学附属第一医院神经外科; 暨南大学医学院解剖学教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31170941);中央高等院校基本科研业务费专项资金资助项目(21612424);广东省科技计划资助项目(2010B031600102)
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目的探讨坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)对神经元突起生长的作用。方法构建CRMP5真核表达载体,采用基因转染、实时定量PCR和免疫印迹技术评估CRMP5基因表达;以空载体为对照组,设3个复孔,用时差成像技术和突起提取技术观察和检测原代培养海马神经元突起的生长。结果成功构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签蛋白的CRMP5的真核表达载体。脂质体转染技术可成功把CRMP5基因导入细胞,转染的细胞CRMP5表达高于空载体对照组;CRMP5蛋白表达于神经元的胞体和突起,尤其是胞体、突起起始处和突起末端高表达。过表达CRMP5可明显促进突起生长,主要表现为突起的生长,并形成丰富的侧枝;定量结果显示,CRMP5过表达的细胞突起的长度逐渐延长,而且较空载体转染细胞增多,差异显著(P<0.01)。导入CRMP5的细胞突起提取液的吸光度较对照细胞明显升高(P<0.01)。结论 CRMP5能促进神经元突起及其分支的生长。
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