【摘 要】
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目的:研究结核分枝杆菌裂解物(MTL)刺激后的成骨细胞来源外泌体(MTL-OB-Exo)对破骨细胞形成的影响.方法:采用细胞增殖与毒性实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)确定MTL的最佳剂
【机 构】
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宁夏医科大学总医院骨科 750001银川市;宁夏医科大学临床医学院 750001银川市
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目的:研究结核分枝杆菌裂解物(MTL)刺激后的成骨细胞来源外泌体(MTL-OB-Exo)对破骨细胞形成的影响.方法:采用细胞增殖与毒性实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)确定MTL的最佳剂量为35.9ng/ml,用最佳剂量的MTL刺激小鼠成骨细胞,采用差速离心法分离、提取MTL-OB-Exo和正常小鼠成骨细胞来源外泌体(OB-Exo),经透射电镜观察其形态及大小,采用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测外泌体跨膜蛋白CD9和成骨细胞特异性碱性磷酸酶(AKP)的表达.将小鼠破骨细胞的前体细胞单核巨噬细胞(RAW264.7),按不同的干预方式分为三组:实验组,MTL-OB-Exo(10ng/ml);对照组,OB-Exo(10ng/ml);空白组,不予任何处理.培养4d后,在光学显微镜下观察RAW264.7的分化情况,并采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(tartrate resistant acid-phosphatase,TRAP),观察各组破骨细胞的形态并计数,比较破骨细胞形成的数量.同样的分组条件下,将干预后的细胞在骨磨片上培养10d,采用亚甲蓝染色,观察各组骨吸收陷窝的形态并计数,比较骨吸收陷窝形成的数量.结果:MTL-OB-Exo为直径30～100nm的圆形或椭圆形结构,高表达CD9和AKP蛋白.采用不同的方式对RAW264.7进行干预后,实验组破骨细胞形成的数量为39.60±1.95个,显著高于对照组(30.20±1.64个)和空白组(28.80±1.58个),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组骨吸收陷窝数量为21.40±1.52个,显著高于对照组(16.20±1.30个)和空白组(14.40±1.52个),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MTL-OB-Exo可以诱导并增强破骨细胞的形成,造成骨质破坏.
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