【摘 要】
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目的 运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人气道上皮细胞株9HTE的核因子κB(NF-κB) /p65基因,探讨NF-κB/p65的活化在C反应蛋白(CRP)诱导的人气道上皮细胞凋亡中的作用及调控机制.方
【机 构】
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南昌大学第一附属医院呼吸内科 330006南昌县人民医院呼吸内科 330200;九江市濂溪区人民医院内科 332000;
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目的 运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人气道上皮细胞株9HTE的核因子κB(NF-κB) /p65基因,探讨NF-κB/p65的活化在C反应蛋白(CRP)诱导的人气道上皮细胞凋亡中的作用及调控机制.方法 体外培养人气道上皮细胞株9HTE,利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的NF-κB/p65小干扰RNA (siRNA)转染人9HTE细胞,给予终浓度50 μg/L的CRP刺激24 h,免疫组织化学检测NF-κB/p65的活化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB/p65、Bcl 2和Bax mRNA的表达,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化.结果 化学合成的NF-κB/p65 siRNA可以抑制9HTE细胞NF-κB/p65 mRNA的表达及NF-κB/p65的活化,与CRP组和CRP+ scramble siRNA组相比,NF-κB/p65 siRNA组Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显减少(P＜0.05),Bax mRNA和蛋白表达明显增加(P＜0.05),流式细胞仪显示NF-κB/p65 siRNA组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 利用siRNA干扰沉默NF-κB/p65基因,可以有效抑制CRP介导的气道上皮细胞凋亡,表明NF-κB的活化可以促进气道上皮细胞中的凋亡,其机制之一可能是通过调控BcF2和Bax的表达发挥诱导细胞凋亡的作用.
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