【摘 要】
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目的 ·构建大鼠Eap1-shRNA慢病毒干扰载体,观察在细胞阻断Eap1基因表达对Kiss1基因表达的影响。方法 ·针对大鼠Eap1基因mRNA序列设计4条shRNA干扰序列及1条阴性对
【基金项目】
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国家自然科学基金（81370686）
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目的 ·构建大鼠Eap1-shRNA慢病毒干扰载体,观察在细胞阻断Eap1基因表达对Kiss1基因表达的影响。方法 ·针对大鼠Eap1基因mRNA序列设计4条shRNA干扰序列及1条阴性对照序列,序列合成后连接至LV3质粒构建重组慢病毒质粒载体。经鉴定正确后,与包装质粒pGag/Pol、pRev、p VSV-G共同转染293T细胞进行慢病毒包装并测定病毒滴度。将构建好的慢病毒感染NRK-52E细胞,感染72 h后收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting
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