重组融合蛋白MBP-BSH在大肠杆菌中的表达及其纯化、功能鉴定

• 作 者: 黄茜 黄璐 潘道东 杨瑶
• 机 构: 南京师范大学国家乳品加工技术研发分中心,宁波大学海洋学院
• 出 处: 食品科学
• 发表日期: 2012年7期
• 关键词: 融合蛋白MBP-BSH 表达纯化 功能鉴定 胆盐水解酶
• 基金项目: 江苏省高校自然科学基金项目(09KJB550003)

选择IF2融合标签，另选择含SUMO、GST、NusA和MBP融合标签的质粒构建表达载体。SDS-PAGE电泳结果显示，重组菌Escherichia Rosetta（DE3）（pLS932-BSH）的诱导表达细胞提取液上清出现了明显的融合蛋白MBP．BSH条带，经诱导表达条件优化后，MBP-BSH可溶性大幅度提高。用Ni-NTAResin和Amylose Resin分别进行目标蛋白纯化，结果显示前者效果更好，并且C端融合His-Tag更有利于其与Ni离子结合，MBP-BSH蛋白纯化量更大，杂带更少。茚三酮