【摘 要】
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目的 构建携带大鼠HGF基阂的慢病毒载体,并观察慢病毒对体外分选的β2 m-/Thy-1+BDLSCs转染效果及影响.方法 采用RT-PCR法从大鼠肝脏中提取HGF基因,并将其克隆到穿梭质粒TG00
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院消化内科,上海,200092
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目的 构建携带大鼠HGF基阂的慢病毒载体,并观察慢病毒对体外分选的β2 m-/Thy-1+BDLSCs转染效果及影响.方法 采用RT-PCR法从大鼠肝脏中提取HGF基因,并将其克隆到穿梭质粒TG006,与包装质粒一起在293T细胞中重组产生LentiviralHGF慢病毒.通过免疫磁珠法体外分选出β2 m-/Thy-1+ BDLSCs;采用荧光显微镜检测LentiviralHGF对BDLSCs的转染效率;采用ELISA法检测大鼠HGF的蛋白分泌水平;采用MTT法和免疫荧光法分别检测病毒对增殖和分化的影响.结果 从纤维化大鼠肝脏中成功克隆出HGF基因,并构建LentiviralHGF慢病毒;慢病毒能高效转染BDLSCs.转染慢病毒的BDLSCs向胞外分泌高浓度的HGF.转染LentiviralHGF后,细胞增殖能力提高,ALB表达阳性.结论 LentiviralHGF能高效转染BDLSCs,两者结合为肝纤维化的研究奠定了基础.
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