【摘 要】
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目的 探讨RNA干扰负性共刺激分子B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)表达后小鼠淋巴细胞增殖的变化.方法 构建小鼠BTLA基因小发夹RNA(shRNA)质粒载体pSiencer 3.1-BTLA/shRNA,与H1启
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目的 探讨RNA干扰负性共刺激分子B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)表达后小鼠淋巴细胞增殖的变化.方法 构建小鼠BTLA基因小发夹RNA(shRNA)质粒载体pSiencer 3.1-BTLA/shRNA,与H1启动子共同亚克隆至慢病毒载体pLB,包装病毒后转导小鼠脾淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测感染效率及BTLA分子表达水平.以刀豆蛋白A(ConA)及抗CD3单抗刺激BTLA shRNA干扰组为实验组,以未行基因沉默组为对照组,CCK-8法测定各组淋巴细胞增殖水平.结果 成功构建3个pLB-BTLA shRNA慢病毒干扰载体和一个非特异性shRNA载体,并制备高滴度病毒.特异性shRNA干扰组BTLA表达水平较对照组明显降低(约40%).抗CD3单抗刺激BTLA shRNA转染的淋巴细胞后增殖水平(A450值)显著增高(3.80±0.58),与未转染shRNA对照组(2.42±0.72)相比差异有统计学意义(P＜0.05),而ConA刺激后细胞增殖水平shRNA转染组与未转染组相比差异无统计学意义(P＞0.05);组间相比,BTLA基因沉默的小鼠脾淋巴细胞经抗CD3单抗处理后细胞增殖水平较ConA处理组明显增高(P＜0.05).结论 慢病毒载体携带的特异性shRNA可有效干扰小鼠脾淋巴细胞BTLA基因的表达,BTLA基因沉默对淋巴细胞增殖具有促进作用.
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