【摘 要】
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Prox1(prospero-related homeobox protein 1)作为转录因子在胚胎发育过程中起关键调控作用.为探究鸡(Gallus gallus)Prox1蛋白亚细胞定位及其在鸡生长发育中的基因表达规律,
【机 构】
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贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室,贵阳550025贵州大学动物科学学院,贵阳550025;贵阳市乌当区农业农村局,贵阳550000;
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Prox1(prospero-related homeobox protein 1)作为转录因子在胚胎发育过程中起关键调控作用.为探究鸡(Gallus gallus)Prox1蛋白亚细胞定位及其在鸡生长发育中的基因表达规律,本研究以前期构建的pCR2.1-Prox1克隆载体为基础,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-Prox1,将其转染人(Homo sapien)胚胎肾细胞(HEK-293T),通过Western blot方法检测重组蛋白的表达,利用倒置荧光显微镜观察重组蛋白的亚细胞定位;采用qRT-PCR技术检测Prox1基因在鸡胚胎期14 d(E14 d)、0日龄(0 d)、7日龄(7 d)和14日龄(14 d)4个时间点各组织中的表达情况.结果显示,本研究成功构建了鸡Prox1基因的重组真核表达载体pEGFP-C1-Prox1,转染细胞后重组蛋白EGFP-Prox1成功表达;荧光观察显示,EGFP-Prox1重组蛋白主要定位在细胞核.qRT-PCR检测结果显示,在不同组织中,Prox1基因在鸡E14 d和7 d的胃中表达最高,0和14 d的肺脏中表达最高;在不同时间点的表达趋势显示,Prox1在眼球和大脑中表达稳定;心脏中在7 d后开始呈上升趋势;肝脏和肺脏中均在E14 d表达最低,在14 d表达最高,整体呈上升趋势;胃和腿肌中在E14 d表达最高,0 d表达最低,7 d有较高表达,呈W型表达趋势;胸肌中,从E14 d到7 d表达逐渐增加,之后开始下降,到14 d表达最低.本研究结果可为进一步研究Prox1基因参与调控鸡不同组织发育的机理提供参考依据.
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