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摘要
玉米象Sitophilus zeamais （Motschulsky）的卵、幼虫以及蛹在粮食籽粒内部生活与发育，粮粒结构会影响熏蒸气体的渗透以及对隐蔽虫态的杀虫效果，了解粮粒内卵、幼虫、蛹以及成虫对磷化氢耐受能力的差异，有助于科学有效杀虫。本文测定了3个玉米象品系对磷化氢的抗药性，及在100、200、300、400和500 mL/m3的磷化氢浓度下玉米象成虫及其隐蔽虫态卵、幼虫和蛹在不同熏蒸时间的死亡率。主要结果为：3个品系的玉米象对磷化氢均未产生抗性。在各磷化氢浓度下，经6 h熏蒸后100 mL/m3浓度下成虫的死亡率近59%，而500 mL/m3浓度下死亡率在91%以上；经12 h熏蒸后各品系成虫的死亡率均达100%，而其卵、幼虫和蛹死亡率均小于100%；经24 h熏蒸后，各品系的卵、幼虫和蛹死亡率达100%的磷化氢浓度需要在400 mL/m3及以上；经36 h熏蒸后，100 mL/m3浓度可完全致死玉米象BJXNSz品系的卵、幼虫和蛹，但对另外两個品系的卵、幼虫和蛹的致死率小于100%；磷化氢熏蒸48 h以上的各浓度均可完全致死受试害虫。结果表明，100 mL/m3以上的磷化氢浓度均可在不同时间致死玉米象各虫态，但完全致死玉米象各虫态的时间在100 mL/m3浓度下需要48 h，在500 mL/m3浓度下需要24 h，浓度升高完全致死害虫的时间缩短。玉米象卵、幼虫和蛹对磷化氢耐受力相接近且远大于成虫。
关键词
磷化氢；玉米象；虫态；耐受力；完全致死
中图分类号：
S 481.4
文献标识码：A
DOI：10.3969/j.issn.05291542.2017.01.017
Abstract
Eggs， larvae and pupae of Sitophilus zeamais Motschulsky all survive and develop in the wheat kernel， which can affect fumigant penetration into seeds and killing of hidden insects. The exposure time and concentration are important to the mortality of insects under fumigation conditions， especially for the immature stages. The resistance of three strains of S.zeamais was monitored， and the mortalities of egg， larvae， pupae and adults of the insect were assayed at the concentrations of 100， 200， 300， 400 and 500 mL/m3 of phosphine. The results indicated that there was no resistance to phosphine among the three S.zeamais strains. The mortality of adults changed from 59% at 100 mL/m3to above 91% at 500 mL/m3for 6 h. The mortality of adults was 100% after 12 h， while the mortalities for egg， pupa and larva were below 100% for all concentrations in 12 h. The mortalities of eggs， larvae and pupae were achieved in 24 h under fumigation with 400 mL/m3or more phosphine. Fumigation for 36 h was lethal to the eggs， larvae and pupae of the strain BJXNSz but not to the other two strains. Fumigation for more than 48 h at all tested concentrations of phosphine could completely kill all insects of any stages. The results indicated that phosphine at more than 100 mL/m3 could kill all stages of S.zeamais in the exposure time tested. The lethality to all stages of S.zeamais could be achieved by fumigation with phosphine of 100 to 500 mL/m3 in the exposure time from 48 h to 24 h accordingly. The tolerance of eggs， larvae and pupa of the insect to phosphine was similar and stronger than that of the adult.
Key words
phosphine；Sitophilus zeamais；stage；tolerance；mortality
磷化氢因具有杀虫效果好、扩散性好、吸附性低、无有害残留等特点，在储粮害虫防治中广为使用[12]，是目前世界上性能最优良的熏蒸剂之一[3]。在磷化氢的使用过程中，由于种种主、客观原因导致熏蒸失败，害虫抗药性存在一定程度的发展[4]。我国重要的储粮害虫如米象、谷蠹、赤拟谷盗等均对磷化氢产生了较为严重的抗性，导致磷化氢熏蒸杀虫不彻底，防治效果差[3]。了解害虫对磷化氢的抗性水平与动态，对实现害虫有效治理和避免抗性发展具有重要意义。小麦等原粮在储藏中易于受到头号储粮害虫玉米象Sitophilus zeamais （Motschulsky）的感染和危害[5]。玉米象可对多种谷物及加工品、干果、豆类、药材、油料等造成严重危害，尤其以阴暗潮湿的仓库为最[6]。该害虫以成虫啃食或幼虫蛀食的方式为害谷粒，贮存2～3年左右的陈粮平均虫蛀率可达3.76%[78]。在适宜条件下，玉米象在3个月内造成粮食储藏重量损失可达11.25%，6个月内可达35.12%[9]。在用磷化氢熏蒸时，玉米象是经常要面对的杀除目标，关于其对磷化氢的抗性需要时常关注，从以往对玉米象的抗性研究报道来看，其对磷化氢的抗性发生频率较低， 如联合国粮农组织对82个国家和地区（包括中国北京、上海、台湾）的8种主要储粮害虫计800多个样品进行抗性测定，其中玉米象未见抗性品系[10]；梁权、林国番、邢玉琢、蒋庆慈等[1114]检测了广东、浙江、吉林及湖北的害虫样本，玉米象也均为敏感品系；成都粮食储藏科学研究所[15]报道从14个省采集的183个玉米象品系基本无抗性；严晓平等[16]调查了我国23个省（市、自治区）计26个玉米象品系，发现云南昆明玉米象品系抗性系数只有22.9；曹阳[17]测定的我国16个省（市、自治区）的玉米象均为敏感品系；周天智等[3]报道了湖北省荆门地区的玉米象抗性系数为8.1～9.4倍。从以上报道可以看出，玉米象对磷化氢的抗性总体较轻，但也处在变化中，个别品系具有了磷化氢抗性。近年来有关玉米象对磷化氢的抗性研究很少，磷化氢熏蒸对隐藏于小麦籽粒内的玉米象卵、幼虫、蛹的致死效果更是少有报道。作者于2014年采集了我国南北3个省份的玉米象，在测定其对磷化氢抗性的基础上，进一步测定了磷化氢对玉米象成虫及粮粒内卵、幼虫和蛹的致死效果与时间，以期为玉米象的科学治理和磷化氢杀虫提供参考。
1材料与方法
1.1试虫来源
试验中所用玉米象系2014年6月采集于北京市西南郊国家粮食储备库，记为BJXNSz；中央储备粮昆明直属库，记为YNKMSz；四川省巴中国家粮食储备库，记为SCBZSz。之后，在河南工业大学储藏物昆虫研究室培养备用。
1.2抗性测定
采用FAO推荐的熏蒸剂抗性测定方法[18]进行试虫的磷化氢抗性测定。在试验中磷化氢的浓度检测单位为mg/L，在抗性计算时以720为换算系数将磷化氢浓度转换为mL/m3。
1.3磷化氢对不同虫态玉米象的致死浓度和时间的测定
1.3.1熏蒸室
在特制熏蒸室中控制不同磷化氫浓度。熏蒸室的结构为长60 cm宽35 cm高40 cm的可密封钢板箱体，箱顶面用有机玻璃与箱体密封接合。箱体一侧设置密闭乳胶手套操作口，用于试虫样本等的置放，可在密封状态下通过操作口将熏蒸室内的虫笼经取虫缓冲仓取出。取虫缓冲仓为密封固定于箱体壁上的不锈钢圆柱体，其两端采用旋口密封盖。移出虫笼时，首先通过密封手套打开缓冲仓在箱体内的密封盖，将拟取虫笼移到其中，密封此盖使之处于密封状，然后打开缓冲仓在箱体外的密封盖，将虫笼取出并迅速密封。在熏蒸室右上和左下侧位置各设1个气体环流及检测口，并兼有气体注入口功能，采用针阀控制。将磷化氢检测仪通过导气管串联进气和出气口后，既可检测箱体内磷化氢浓度，同时可使箱体内气体环流均匀。另在熏蒸室底部置1个含过饱和氯化钠溶液的小烧杯以控制熏蒸室内相对湿度（70%±5%RH）， 见图1。
1.3.2虫笼的置入与浓度控制
先进行预备试验，预测完全致死害虫所需的时间，再根据设定的磷化氢浓度设计不同浓度下的取样时间，再根据取样时间点设置虫笼数量。将待熏蒸的虫笼全部放于熏蒸室内，密封后经气体注入口注入磷化氢，通过检测、环流和调节控制至目标浓度。以后每天检测熏蒸室内磷化氢浓度，并及时补充或调整至目标浓度。熏蒸室内磷化氢浓度分别设置与控制为100、200、300、400和500 mL/m3。在同样环境条件下设置非熏蒸对照组。
1.3.3试虫熏蒸与处置
成虫的熏蒸与处理：取50头羽化后14 d的成虫放入虫笼（直径10 mm、长70 mm，两端开口，玻璃材质）中，加入适量小麦籽粒（水分含量14%±0.2%），两端用亚麻布封口。每个玉米象品系设3个平行，3个品系为1组，根据设置的时间点将虫笼放在熏蒸室内用不同浓度的磷化氢熏蒸。在熏蒸过程中每6 h取出1组试虫，取出后在原条件下培养14 d后检查其最终死亡情况。另设未熏蒸组同步进行上述操作。
卵的熏蒸与处理：取清洁除虫后的小麦籽粒（水分含量14%±0.2%）300 g，置于大型广口瓶中接入羽化14 d的玉米象成虫500头，在28℃，70%±2% RH条件下感染24 h后移出成虫得到感染虫卵的小麦。2 d后将感染虫卵的小麦用漏斗式粮食分样器进行分样，经连续7级“一分为二、再一分二”的逐个分样，最后得到128个平行小样，每个小样重量约为2.34 g。将每个玉米象品系感染虫卵的小样装入虫笼中，取3个平行，3个品系为1组，根据设置的取样时间点设置虫笼数量，并在熏蒸室内用不同浓度的磷化氢进行熏蒸。每12 h取出1组虫笼，在原培养条件下培养。参考玉米象在28℃的发育历期，在成虫羽化期每日观察样品中出现的成虫数量，至连续3 d不再有新的成虫出现时，对全部粮粒进行剖粒检查，其中存活的蛹或未羽化出的成虫一并计为活虫。另设1组未熏蒸样品，同样进行剖粒检查，计算从卵发育至成虫或蛹的数量，得出卵存活的平均值。记录熏蒸样本中成虫或蛹的存活数，再以该存活数分别除以对照样本中卵存活的平均值，得每个平行样本的存活率，并换算为相应的死亡率。将每个品系玉米象3个平行的死亡率进行差异性分析，得其平均死亡率±标准差。
幼虫的熏蒸与处理：在如前述得到128个平行含卵小样中，选其中1个小样进行逐日定时剖粒观察，当其中的卵孵化为幼虫时，取带有2日龄幼虫的小麦，采用卵的熏蒸方法进行熏蒸，以未熏蒸为对照，并按照同样方法得出不同熏蒸浓度与时间点下幼虫的死亡率。
蛹的熏蒸与处理：如同前述虫卵和幼虫的处理过程，在逐日定时剖粒观察至幼虫化蛹后，取带有3日龄蛹的小麦样本，分别进行如同带卵样本的熏蒸及对照处理，采用与卵相同的熏蒸方法和对照处理，并按照同样方法得出不同熏蒸浓度与时间点下蛹的死亡率。
1.3.4磷化氢浓度检测
熏蒸中采用HL210型磷化氢浓度检测仪进行浓度检测，仪器的检测范围为0～2 000 mL/m3，误差±5%。检测仪器在试验前经厂家校准，并与实验室方法进行比对，检测状态正常。 1.4数据处理
害虫抗性测定结果采用DPS软件处理，得出相应的LC50值、LC99值、毒力回归方程、χ2值及抗性系数（Rf）。不同磷化氢浓度下各样本死亡率数据采用SPSS软件和Microsoft Excel 2010 进行处理。
2结果与分析
2.1玉米象对磷化氢的抗性
玉米象3个品系的抗性测定结果见表1，其中参考品系的LC50值参照FAO推荐正常磷化氢敏感品系的数值（0.007 mg/L）。测定品系的玉米象对磷化氢的抗性系数基本等于1，表明所测品系的玉米象对磷化氢未产生抗性，其中采自北京的玉米象品系的LC50值比FAO推荐方法中的玉米象参考值还要小。
2.2不同浓度磷化氢对不同虫态玉米象在不同时间的致死率
2.2.1不同浓度磷化氢熏蒸不同时间后玉米象成虫的死亡率
如表2所示，经磷化氢熏蒸6 h后，BJXNSz品系成虫在100～400 mL/m3 的浓度下死亡率均达94%以上，且在500 mL/m3浓度下死亡率达100%，YNKMSz和SCBZSz品系成虫在相应磷化氢浓度下的死亡率较BJXNSz品系低。在各磷化氢浓度下经12 h熏蒸后，除SCBZSz品系成虫在100 mL/m3浓度下的死亡率为87.78%外， 其他浓度下各品系的成虫均达100%死亡。以上结果说明，3个未产生磷化氢抗性的玉米象品系其成虫在低熏蒸强度（低浓度和短时间）下对磷化氢耐受力有差异，即在6～12 h的短时间熏蒸过程中死亡率有所不同，但当熏蒸时间延长或磷化氢浓度提高后， 3个品系的成虫均可在18 h内全部死亡，成虫品系间的耐受力差异不明显。结果表明，玉米象成虫对100 mL/m3浓度的磷化氢耐受力很低。
2.2.2不同浓度磷化氢熏蒸不同时间后玉米象卵和蛹的死亡率
不同浓度的磷化氢对卵和蛹的熏蒸结果表明，3個品系的玉米象在各磷化氢浓度下经12 h熏蒸后，卵的死亡为33.33%～96.97%，蛹的死亡率为33.33%～92.42%，均较相应时间幼虫和成虫的死亡率低。同样时间内，磷化氢浓度每增高100 mL/m3，其卵和蛹的死亡率均有显著升高。以上结果说明磷化氢可在12 h内杀死隐藏于粮粒内的玉米象卵和蛹，浓度不同时致死卵和蛹的数量有显著差异，3个玉米象品系间虫卵和蛹在如此短时间的熏蒸中对磷化氢耐受力差异明显。
在100 mL/m3和200 mL/m3磷化氢浓度下，BJXNSz品系的卵经36 h熏蒸完全死亡，YNKMSz和SCBZSz品系的卵经48 h完全死亡，同样浓度下不同时间的死亡率差异显著。300 mL/m3磷化氢浓度经24 h 可100%致死BJXNSz品系的卵，但完全致死YNKMSz和SCBZSz品系的卵则需要36 h，磷化氢浓度升高后同样时间内对玉米象卵的致死率显著提高，致卵完全死亡的时间显著缩短。3个玉米象品系的蛹在不同磷化氢浓度下的死亡率与其相应的卵死亡率变化趋势相近。结果说明，延长熏蒸时间可以显著提高同浓度下虫卵和蛹的死亡率，完全致死不同玉米象卵和蛹的时间与浓度差异显著。
2.2.3不同浓度磷化氢熏蒸不同时间后玉米象幼虫的死亡率
从对幼虫的熏蒸结果看，在最低100 mL/m3浓度下经过12 h粮粒内的各品系玉米象幼虫死亡超过50%，随着磷化氢浓度升高幼虫的死亡率增加明显，但在高达500 mL/m3的浓度下粮粒内的幼虫仍有一定存活。在100、200和300 mL/m3浓度下经24 h熏蒸，幼虫死亡率随浓度增大而明显增加，但均未达到100%死亡率，在400和500 mL/m3的浓度下经24 h熏蒸3个玉米象品系的幼虫被完全致死。在各熏蒸浓度下经36 h熏蒸均可完全致死粮粒内的幼虫。结果显示，磷化氢对3个不同玉米象品系幼虫在同样时间的死亡率差异不显著，其原因可能与幼虫处于取食与快速生长期有关，幼虫在取食和生长过程中代谢旺盛，呼吸强度较大，吸入磷化氢的量也较大而易于死亡。
2.2.4玉米象不同虫态对磷化氢耐受力比较
根据磷化氢对3个玉米象品系不同虫态的完全致死最低浓度（或时间）计算其Ct值。结果表明，完全致死蛹和卵的最小Ct值分别为3 600 mL/m3·h（BJXNSc）和4 800 mL/m3·h（YNKMSc、SCBZSc），完全致死成虫的最小Ct值为1 200 mL/m3·h（BJXNSc、YNKMSc）和1 800 mL/m3·h（SCBZSc），完全致死幼虫的最小Ct值均为3 600 mL/m3·h。不同磷化氢浓度下完全致死时间Ct值与浓度有关，如对于BJXNSc品系，磷化氢浓度为100 mL/m3时的完全致死Ct值为3 600 mL/m3·h，300 mL/m3浓度下的Ct值为10 800 mL/m3·h，结果说明低浓度时Ct值较小，高浓度下Ct值较大。同一品系内不同虫态对磷化氢的耐受力总体上可以描述为：蛹略大于卵、卵略大于幼虫，卵、蛹和幼虫远大于成虫。
3讨论
从鞘翅目害虫不同虫态对磷化氢的耐受力来看，一般其卵和蛹的耐受力要大于幼虫和成虫[19]。本研究结果表明，所测定的3个玉米象品系对磷化氢耐受力大小大体上可排列为：蛹≈卵≈幼虫>成虫。磷化氢可以在较短的时间内杀死隐蔽于粮粒内部的玉米象卵、幼虫和蛹，杀死成虫所需的时间更短。从完全致死各虫态的Ct值可以看出，低浓度长时间的熏蒸杀死玉米象的Ct值要明显小于高浓度下致死害虫的Ct值；玉米象中耐受力最强的虫态是卵或蛹，从完全致死所需的时间和浓度来说，玉米象比锈赤扁谷盗、赤拟谷盗、谷蠹、米象等害虫易于杀死[20]。
磷化氢被用于储粮熏蒸已近70年[3]，多种常见储粮害虫已对磷化氢已表现出很高的抗性[3，2022]。对于玉米象而言，已有报道中玉米象抗性品系少见或抗性很低[1017]。本研究结果再次说明，玉米象对磷化氢的抗性仍然不高。从杀虫过程上说，玉米象很容易被完全杀死而少有熏蒸后仍存活情况，故而抗性不易发展，因此其对磷化氢抗性较低机制值得进一步探讨。从试验中隐蔽于粮粒内的各虫态也较易于被熏蒸致死的结果看，磷化氢较易渗透过感染玉米象的粮粒并致死其中的卵、幼虫和蛹。
玉米象Sitophilus zeamais （Motschulsky）的卵、幼虫以及蛹在粮食籽粒内部生活与发育，粮粒结构会影响熏蒸气体的渗透以及对隐蔽虫态的杀虫效果，了解粮粒内卵、幼虫、蛹以及成虫对磷化氢耐受能力的差异，有助于科学有效杀虫。本文测定了3个玉米象品系对磷化氢的抗药性，及在100、200、300、400和500 mL/m3的磷化氢浓度下玉米象成虫及其隐蔽虫态卵、幼虫和蛹在不同熏蒸时间的死亡率。主要结果为：3个品系的玉米象对磷化氢均未产生抗性。在各磷化氢浓度下，经6 h熏蒸后100 mL/m3浓度下成虫的死亡率近59%，而500 mL/m3浓度下死亡率在91%以上；经12 h熏蒸后各品系成虫的死亡率均达100%，而其卵、幼虫和蛹死亡率均小于100%；经24 h熏蒸后，各品系的卵、幼虫和蛹死亡率达100%的磷化氢浓度需要在400 mL/m3及以上；经36 h熏蒸后，100 mL/m3浓度可完全致死玉米象BJXNSz品系的卵、幼虫和蛹，但对另外两個品系的卵、幼虫和蛹的致死率小于100%；磷化氢熏蒸48 h以上的各浓度均可完全致死受试害虫。结果表明，100 mL/m3以上的磷化氢浓度均可在不同时间致死玉米象各虫态，但完全致死玉米象各虫态的时间在100 mL/m3浓度下需要48 h，在500 mL/m3浓度下需要24 h，浓度升高完全致死害虫的时间缩短。玉米象卵、幼虫和蛹对磷化氢耐受力相接近且远大于成虫。
关键词
磷化氢；玉米象；虫态；耐受力；完全致死
中图分类号：
S 481.4
文献标识码：A
DOI：10.3969/j.issn.05291542.2017.01.017
Abstract
Eggs， larvae and pupae of Sitophilus zeamais Motschulsky all survive and develop in the wheat kernel， which can affect fumigant penetration into seeds and killing of hidden insects. The exposure time and concentration are important to the mortality of insects under fumigation conditions， especially for the immature stages. The resistance of three strains of S.zeamais was monitored， and the mortalities of egg， larvae， pupae and adults of the insect were assayed at the concentrations of 100， 200， 300， 400 and 500 mL/m3 of phosphine. The results indicated that there was no resistance to phosphine among the three S.zeamais strains. The mortality of adults changed from 59% at 100 mL/m3to above 91% at 500 mL/m3for 6 h. The mortality of adults was 100% after 12 h， while the mortalities for egg， pupa and larva were below 100% for all concentrations in 12 h. The mortalities of eggs， larvae and pupae were achieved in 24 h under fumigation with 400 mL/m3or more phosphine. Fumigation for 36 h was lethal to the eggs， larvae and pupae of the strain BJXNSz but not to the other two strains. Fumigation for more than 48 h at all tested concentrations of phosphine could completely kill all insects of any stages. The results indicated that phosphine at more than 100 mL/m3 could kill all stages of S.zeamais in the exposure time tested. The lethality to all stages of S.zeamais could be achieved by fumigation with phosphine of 100 to 500 mL/m3 in the exposure time from 48 h to 24 h accordingly. The tolerance of eggs， larvae and pupa of the insect to phosphine was similar and stronger than that of the adult.
Key words
phosphine；Sitophilus zeamais；stage；tolerance；mortality
磷化氢因具有杀虫效果好、扩散性好、吸附性低、无有害残留等特点，在储粮害虫防治中广为使用[12]，是目前世界上性能最优良的熏蒸剂之一[3]。在磷化氢的使用过程中，由于种种主、客观原因导致熏蒸失败，害虫抗药性存在一定程度的发展[4]。我国重要的储粮害虫如米象、谷蠹、赤拟谷盗等均对磷化氢产生了较为严重的抗性，导致磷化氢熏蒸杀虫不彻底，防治效果差[3]。了解害虫对磷化氢的抗性水平与动态，对实现害虫有效治理和避免抗性发展具有重要意义。小麦等原粮在储藏中易于受到头号储粮害虫玉米象Sitophilus zeamais （Motschulsky）的感染和危害[5]。玉米象可对多种谷物及加工品、干果、豆类、药材、油料等造成严重危害，尤其以阴暗潮湿的仓库为最[6]。该害虫以成虫啃食或幼虫蛀食的方式为害谷粒，贮存2～3年左右的陈粮平均虫蛀率可达3.76%[78]。在适宜条件下，玉米象在3个月内造成粮食储藏重量损失可达11.25%，6个月内可达35.12%[9]。在用磷化氢熏蒸时，玉米象是经常要面对的杀除目标，关于其对磷化氢的抗性需要时常关注，从以往对玉米象的抗性研究报道来看，其对磷化氢的抗性发生频率较低， 如联合国粮农组织对82个国家和地区（包括中国北京、上海、台湾）的8种主要储粮害虫计800多个样品进行抗性测定，其中玉米象未见抗性品系[10]；梁权、林国番、邢玉琢、蒋庆慈等[1114]检测了广东、浙江、吉林及湖北的害虫样本，玉米象也均为敏感品系；成都粮食储藏科学研究所[15]报道从14个省采集的183个玉米象品系基本无抗性；严晓平等[16]调查了我国23个省（市、自治区）计26个玉米象品系，发现云南昆明玉米象品系抗性系数只有22.9；曹阳[17]测定的我国16个省（市、自治区）的玉米象均为敏感品系；周天智等[3]报道了湖北省荆门地区的玉米象抗性系数为8.1～9.4倍。从以上报道可以看出，玉米象对磷化氢的抗性总体较轻，但也处在变化中，个别品系具有了磷化氢抗性。近年来有关玉米象对磷化氢的抗性研究很少，磷化氢熏蒸对隐藏于小麦籽粒内的玉米象卵、幼虫、蛹的致死效果更是少有报道。作者于2014年采集了我国南北3个省份的玉米象，在测定其对磷化氢抗性的基础上，进一步测定了磷化氢对玉米象成虫及粮粒内卵、幼虫和蛹的致死效果与时间，以期为玉米象的科学治理和磷化氢杀虫提供参考。
1材料与方法
1.1试虫来源
试验中所用玉米象系2014年6月采集于北京市西南郊国家粮食储备库，记为BJXNSz；中央储备粮昆明直属库，记为YNKMSz；四川省巴中国家粮食储备库，记为SCBZSz。之后，在河南工业大学储藏物昆虫研究室培养备用。
1.2抗性测定
采用FAO推荐的熏蒸剂抗性测定方法[18]进行试虫的磷化氢抗性测定。在试验中磷化氢的浓度检测单位为mg/L，在抗性计算时以720为换算系数将磷化氢浓度转换为mL/m3。
1.3磷化氢对不同虫态玉米象的致死浓度和时间的测定
1.3.1熏蒸室
在特制熏蒸室中控制不同磷化氫浓度。熏蒸室的结构为长60 cm宽35 cm高40 cm的可密封钢板箱体，箱顶面用有机玻璃与箱体密封接合。箱体一侧设置密闭乳胶手套操作口，用于试虫样本等的置放，可在密封状态下通过操作口将熏蒸室内的虫笼经取虫缓冲仓取出。取虫缓冲仓为密封固定于箱体壁上的不锈钢圆柱体，其两端采用旋口密封盖。移出虫笼时，首先通过密封手套打开缓冲仓在箱体内的密封盖，将拟取虫笼移到其中，密封此盖使之处于密封状，然后打开缓冲仓在箱体外的密封盖，将虫笼取出并迅速密封。在熏蒸室右上和左下侧位置各设1个气体环流及检测口，并兼有气体注入口功能，采用针阀控制。将磷化氢检测仪通过导气管串联进气和出气口后，既可检测箱体内磷化氢浓度，同时可使箱体内气体环流均匀。另在熏蒸室底部置1个含过饱和氯化钠溶液的小烧杯以控制熏蒸室内相对湿度（70%±5%RH）， 见图1。
1.3.2虫笼的置入与浓度控制
先进行预备试验，预测完全致死害虫所需的时间，再根据设定的磷化氢浓度设计不同浓度下的取样时间，再根据取样时间点设置虫笼数量。将待熏蒸的虫笼全部放于熏蒸室内，密封后经气体注入口注入磷化氢，通过检测、环流和调节控制至目标浓度。以后每天检测熏蒸室内磷化氢浓度，并及时补充或调整至目标浓度。熏蒸室内磷化氢浓度分别设置与控制为100、200、300、400和500 mL/m3。在同样环境条件下设置非熏蒸对照组。
1.3.3试虫熏蒸与处置
成虫的熏蒸与处理：取50头羽化后14 d的成虫放入虫笼（直径10 mm、长70 mm，两端开口，玻璃材质）中，加入适量小麦籽粒（水分含量14%±0.2%），两端用亚麻布封口。每个玉米象品系设3个平行，3个品系为1组，根据设置的时间点将虫笼放在熏蒸室内用不同浓度的磷化氢熏蒸。在熏蒸过程中每6 h取出1组试虫，取出后在原条件下培养14 d后检查其最终死亡情况。另设未熏蒸组同步进行上述操作。
卵的熏蒸与处理：取清洁除虫后的小麦籽粒（水分含量14%±0.2%）300 g，置于大型广口瓶中接入羽化14 d的玉米象成虫500头，在28℃，70%±2% RH条件下感染24 h后移出成虫得到感染虫卵的小麦。2 d后将感染虫卵的小麦用漏斗式粮食分样器进行分样，经连续7级“一分为二、再一分二”的逐个分样，最后得到128个平行小样，每个小样重量约为2.34 g。将每个玉米象品系感染虫卵的小样装入虫笼中，取3个平行，3个品系为1组，根据设置的取样时间点设置虫笼数量，并在熏蒸室内用不同浓度的磷化氢进行熏蒸。每12 h取出1组虫笼，在原培养条件下培养。参考玉米象在28℃的发育历期，在成虫羽化期每日观察样品中出现的成虫数量，至连续3 d不再有新的成虫出现时，对全部粮粒进行剖粒检查，其中存活的蛹或未羽化出的成虫一并计为活虫。另设1组未熏蒸样品，同样进行剖粒检查，计算从卵发育至成虫或蛹的数量，得出卵存活的平均值。记录熏蒸样本中成虫或蛹的存活数，再以该存活数分别除以对照样本中卵存活的平均值，得每个平行样本的存活率，并换算为相应的死亡率。将每个品系玉米象3个平行的死亡率进行差异性分析，得其平均死亡率±标准差。
幼虫的熏蒸与处理：在如前述得到128个平行含卵小样中，选其中1个小样进行逐日定时剖粒观察，当其中的卵孵化为幼虫时，取带有2日龄幼虫的小麦，采用卵的熏蒸方法进行熏蒸，以未熏蒸为对照，并按照同样方法得出不同熏蒸浓度与时间点下幼虫的死亡率。
蛹的熏蒸与处理：如同前述虫卵和幼虫的处理过程，在逐日定时剖粒观察至幼虫化蛹后，取带有3日龄蛹的小麦样本，分别进行如同带卵样本的熏蒸及对照处理，采用与卵相同的熏蒸方法和对照处理，并按照同样方法得出不同熏蒸浓度与时间点下蛹的死亡率。
1.3.4磷化氢浓度检测
熏蒸中采用HL210型磷化氢浓度检测仪进行浓度检测，仪器的检测范围为0～2 000 mL/m3，误差±5%。检测仪器在试验前经厂家校准，并与实验室方法进行比对，检测状态正常。 1.4数据处理
害虫抗性测定结果采用DPS软件处理，得出相应的LC50值、LC99值、毒力回归方程、χ2值及抗性系数（Rf）。不同磷化氢浓度下各样本死亡率数据采用SPSS软件和Microsoft Excel 2010 进行处理。
2结果与分析
2.1玉米象对磷化氢的抗性
玉米象3个品系的抗性测定结果见表1，其中参考品系的LC50值参照FAO推荐正常磷化氢敏感品系的数值（0.007 mg/L）。测定品系的玉米象对磷化氢的抗性系数基本等于1，表明所测品系的玉米象对磷化氢未产生抗性，其中采自北京的玉米象品系的LC50值比FAO推荐方法中的玉米象参考值还要小。
2.2不同浓度磷化氢对不同虫态玉米象在不同时间的致死率
2.2.1不同浓度磷化氢熏蒸不同时间后玉米象成虫的死亡率
如表2所示，经磷化氢熏蒸6 h后，BJXNSz品系成虫在100～400 mL/m3 的浓度下死亡率均达94%以上，且在500 mL/m3浓度下死亡率达100%，YNKMSz和SCBZSz品系成虫在相应磷化氢浓度下的死亡率较BJXNSz品系低。在各磷化氢浓度下经12 h熏蒸后，除SCBZSz品系成虫在100 mL/m3浓度下的死亡率为87.78%外， 其他浓度下各品系的成虫均达100%死亡。以上结果说明，3个未产生磷化氢抗性的玉米象品系其成虫在低熏蒸强度（低浓度和短时间）下对磷化氢耐受力有差异，即在6～12 h的短时间熏蒸过程中死亡率有所不同，但当熏蒸时间延长或磷化氢浓度提高后， 3个品系的成虫均可在18 h内全部死亡，成虫品系间的耐受力差异不明显。结果表明，玉米象成虫对100 mL/m3浓度的磷化氢耐受力很低。
2.2.2不同浓度磷化氢熏蒸不同时间后玉米象卵和蛹的死亡率
不同浓度的磷化氢对卵和蛹的熏蒸结果表明，3個品系的玉米象在各磷化氢浓度下经12 h熏蒸后，卵的死亡为33.33%～96.97%，蛹的死亡率为33.33%～92.42%，均较相应时间幼虫和成虫的死亡率低。同样时间内，磷化氢浓度每增高100 mL/m3，其卵和蛹的死亡率均有显著升高。以上结果说明磷化氢可在12 h内杀死隐藏于粮粒内的玉米象卵和蛹，浓度不同时致死卵和蛹的数量有显著差异，3个玉米象品系间虫卵和蛹在如此短时间的熏蒸中对磷化氢耐受力差异明显。
在100 mL/m3和200 mL/m3磷化氢浓度下，BJXNSz品系的卵经36 h熏蒸完全死亡，YNKMSz和SCBZSz品系的卵经48 h完全死亡，同样浓度下不同时间的死亡率差异显著。300 mL/m3磷化氢浓度经24 h 可100%致死BJXNSz品系的卵，但完全致死YNKMSz和SCBZSz品系的卵则需要36 h，磷化氢浓度升高后同样时间内对玉米象卵的致死率显著提高，致卵完全死亡的时间显著缩短。3个玉米象品系的蛹在不同磷化氢浓度下的死亡率与其相应的卵死亡率变化趋势相近。结果说明，延长熏蒸时间可以显著提高同浓度下虫卵和蛹的死亡率，完全致死不同玉米象卵和蛹的时间与浓度差异显著。
2.2.3不同浓度磷化氢熏蒸不同时间后玉米象幼虫的死亡率
从对幼虫的熏蒸结果看，在最低100 mL/m3浓度下经过12 h粮粒内的各品系玉米象幼虫死亡超过50%，随着磷化氢浓度升高幼虫的死亡率增加明显，但在高达500 mL/m3的浓度下粮粒内的幼虫仍有一定存活。在100、200和300 mL/m3浓度下经24 h熏蒸，幼虫死亡率随浓度增大而明显增加，但均未达到100%死亡率，在400和500 mL/m3的浓度下经24 h熏蒸3个玉米象品系的幼虫被完全致死。在各熏蒸浓度下经36 h熏蒸均可完全致死粮粒内的幼虫。结果显示，磷化氢对3个不同玉米象品系幼虫在同样时间的死亡率差异不显著，其原因可能与幼虫处于取食与快速生长期有关，幼虫在取食和生长过程中代谢旺盛，呼吸强度较大，吸入磷化氢的量也较大而易于死亡。
2.2.4玉米象不同虫态对磷化氢耐受力比较
根据磷化氢对3个玉米象品系不同虫态的完全致死最低浓度（或时间）计算其Ct值。结果表明，完全致死蛹和卵的最小Ct值分别为3 600 mL/m3·h（BJXNSc）和4 800 mL/m3·h（YNKMSc、SCBZSc），完全致死成虫的最小Ct值为1 200 mL/m3·h（BJXNSc、YNKMSc）和1 800 mL/m3·h（SCBZSc），完全致死幼虫的最小Ct值均为3 600 mL/m3·h。不同磷化氢浓度下完全致死时间Ct值与浓度有关，如对于BJXNSc品系，磷化氢浓度为100 mL/m3时的完全致死Ct值为3 600 mL/m3·h，300 mL/m3浓度下的Ct值为10 800 mL/m3·h，结果说明低浓度时Ct值较小，高浓度下Ct值较大。同一品系内不同虫态对磷化氢的耐受力总体上可以描述为：蛹略大于卵、卵略大于幼虫，卵、蛹和幼虫远大于成虫。
3讨论
从鞘翅目害虫不同虫态对磷化氢的耐受力来看，一般其卵和蛹的耐受力要大于幼虫和成虫[19]。本研究结果表明，所测定的3个玉米象品系对磷化氢耐受力大小大体上可排列为：蛹≈卵≈幼虫>成虫。磷化氢可以在较短的时间内杀死隐蔽于粮粒内部的玉米象卵、幼虫和蛹，杀死成虫所需的时间更短。从完全致死各虫态的Ct值可以看出，低浓度长时间的熏蒸杀死玉米象的Ct值要明显小于高浓度下致死害虫的Ct值；玉米象中耐受力最强的虫态是卵或蛹，从完全致死所需的时间和浓度来说，玉米象比锈赤扁谷盗、赤拟谷盗、谷蠹、米象等害虫易于杀死[20]。
磷化氢被用于储粮熏蒸已近70年[3]，多种常见储粮害虫已对磷化氢已表现出很高的抗性[3，2022]。对于玉米象而言，已有报道中玉米象抗性品系少见或抗性很低[1017]。本研究结果再次说明，玉米象对磷化氢的抗性仍然不高。从杀虫过程上说，玉米象很容易被完全杀死而少有熏蒸后仍存活情况，故而抗性不易发展，因此其对磷化氢抗性较低机制值得进一步探讨。从试验中隐蔽于粮粒内的各虫态也较易于被熏蒸致死的结果看，磷化氢较易渗透过感染玉米象的粮粒并致死其中的卵、幼虫和蛹。