【摘 要】
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目的:建立稳定表达人血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)全长的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系,并检测表达产物的生物活性。方法:通过脂质体瞬间转染的方法将含有rhPDGF-BB全长的
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目的:建立稳定表达人血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)全长的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系,并检测表达产物的生物活性。方法:通过脂质体瞬间转染的方法将含有rhPDGF-BB全长的质粒转染CHO细胞系。利用抗生素筛选的方法使转染阳性的细胞扩增和单克隆化,进一步稳定传代。通过Western印迹法挑选高表达克隆,进而使用MTT法检测转染前后细胞增殖活性和转染细胞上清培养NIH3T3细胞的增殖情况。反复传代、冻存和复苏鉴定表达的稳定性。结果:获得稳定且高效表达rhPDGF-BB的CHO细胞系;转染前后细胞生长速度存在差异,NIH3T3细胞的增殖随转染细胞上清的浓度和培养时间的增加而增加。结论:pSELECT-GFPzeo-MCS载体能作为稳定表达的载体用于筛选。稳定表达rhPDGF-BB的CHO细胞具有新的生物学功能,实现了组织工程种子细胞的构建,为研究糖尿病溃疡创面愈合的生物材料提供实验基础。
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