葡萄卷叶病毒外壳蛋白基因的克隆,序列分析及其在大肠杆菌中的表达

• 作 者: 张玉满 腊平
• 机 构: 北京林业大学良种繁育研究中心,中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室
• 出 处: 植物病理学报
• 发表日期: 2000年3期
• 关键词: 葡萄卷叶病毒 外壳蛋白基因 克隆 序列分析 表达 GLRaV3 coat protein gene cloning sequence expressio
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目 !(39770 6 32 )

从我国感染ＧＬＲａＶ的葡萄韧皮部组织中提取到约１８ｋｂ的ＧＬＲａＶ－ｄｓＲＮＡ。以此为模板，采用ＲＴ－ＰＣＲ方法，扩增到约１．０ｋｂ的ＧＬＲａＶ ＣＰ基因ｃＤＮＡ片段，并将共克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体。序列分析表明，ＧＬＲａＶ（中国分离物）ＣＰ基因与美国ＧＬＲａＶ－３ＣＰ基因核苷酸序列同源性达９９．１５％，推导的氨基酸序列同源性为９８．０９％。通过大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２１构建了ＧＬＲａＶ－ＣＰ基因的大肠杆菌蛋白表达克隆，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析及Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ结果表明，有一条约