Ⅰ型单纯疱疹病毒包膜糖蛋白L基因片段的克隆及高效表达

• 作 者: 洪敏 曾丽雯 梁燕 杨子江 李琦涵
• 机 构: 中国医学科学院/中国协和医科大学医学生物学研究所,中国医学科学院/中国协和医科大学医学生物学研究所,中国医学科学院/中国协和医科大学医学生物学研究所,中国医学科学院/中国协和医科大学医学生物学研究所,
• 出 处: 云南大学学报(自然科学版)
• 发表日期: 2007年02期
• 关键词: 单纯疱疹病毒Ⅰ型 包膜糖蛋白L 原核表达

采用PCR方法扩增HSV-1病毒型特异性包膜糖蛋白L(gL)基因片段并克隆至原核表达载体pGEX-5X-1获得重组质粒pGEX-5X-1-gL,将重组质粒转化E.coliBL21表达菌后经IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE蛋白检测表明,在分子质量56 ku处有HSV-1 GST-gL融合蛋白的高效表达,通过IPTG浓度筛选和诱导前表达菌扩增培养时间的比较分析对诱导条件进行了优化,GST-gL融合蛋白表达量可达到菌体蛋白总量的48.65%.Western blot中利用HSV-1灭活病毒获得的多克隆抗体确证所表达蛋白为HSV-1病毒组分.这一表达系统的建立和优化对进一步探讨HSV-1 gL蛋白功能及其免疫原性提供了有利条件.

The HSV-1 virus-specific glycoprotein L (gL) gene fragment was amplified by PCR and cloned into the prokaryotic expression vector pGEX-5X-1 to obtain the recombinant plasmid pGEX-5X-1-gL. The recombinant plasmid was transformed into E. coli. The expression of HSV-1 GST-gL fusion protein was induced by IPTG at the molecular weight of 56 ku, and the expression of HSV-1 GST-gL fusion protein was induced by IPTG. , The expression of GST-gL fusion protein was up to 48.65% of the total amount of bacterial proteins.Western blot using polyclonal antibody against HSV-1 inactivated virus confirmed that the expressed protein was HSV- 1 virus component.The establishment and optimization of this expression system provided favorable conditions for further investigation of the function and immunogenicity of HSV-1 gL protein.