【摘 要】
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目的:对淋病奈瑟菌磷脂酶A蛋白进行生物信息学分析并预测其免疫原性,用原核系统表达并纯化该蛋白.方法:利用生物信息学相关软件进行序列分析以及T细胞表位和B细胞表位预测.PCR扩增磷脂酶A基因,将目的基因连接到原核表达载体pET28a中,并在宿主菌Rosetta(DE3)中IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western印迹检测表达情况,并用淋病奈瑟菌多克隆抗体检测其免疫反应性.结果:磷脂酶A蛋白中位于第12～26和236～250肽段是最佳优势T细胞表位,第281～ 296、331～ 346和354～369
【机 构】
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大理大学基础医学院病原生物学综合实验室,云南大理671000;大理大学基础医学院病原生物学综合实验室,云南大理671000;云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室,云南大理671000;大理大学附属医
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目的:对淋病奈瑟菌磷脂酶A蛋白进行生物信息学分析并预测其免疫原性,用原核系统表达并纯化该蛋白.方法:利用生物信息学相关软件进行序列分析以及T细胞表位和B细胞表位预测.PCR扩增磷脂酶A基因,将目的基因连接到原核表达载体pET28a中,并在宿主菌Rosetta(DE3)中IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western印迹检测表达情况,并用淋病奈瑟菌多克隆抗体检测其免疫反应性.结果:磷脂酶A蛋白中位于第12～26和236～250肽段是最佳优势T细胞表位,第281～ 296、331～ 346和354～369肽段是最佳的优势B细胞表位.成功构建了含有磷脂酶A基因的pET28a重组质粒,并在宿主菌中得到了表达和纯化,Western印迹的结果显示该重组蛋白与特异性免疫血清能具有良好的免疫反应性.结论:预测结果以及重组蛋白的成功制备,为其作为淋病奈瑟菌表位疫苗和分子诊断技术的开发研究提供了基础和参考.
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