基于上转发光免疫层析技术快速定量检测类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立

• 作 者: 华菲 张平平 王晓英 周蕾 赵勇 刘晓 李春凤 杨瑞馥 于爱莲
• 机 构: 271000泰安，泰山医学院病原生物学部,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,海军总医院内分泌科,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,军事医
• 出 处: 中华预防医学杂志
• 发表日期: 2015年49期
• 关键词: 免疫测定 伯霍尔德杆菌 类鼻疽 敏感性与特异性 样本耐受性 操作耐受性 上转发光技术

目的

建立能够对类鼻疽伯克霍尔德菌(类鼻疽菌)进行现场快速定量检测的上转发光免疫层析(Bps–UPT–LF)方法。

方法

以上转发光材料(UCP)作为标记物，采用双抗体夹心法制备用于类鼻疽菌检测的Bps–UPT–LF试纸。采用分别由类鼻疽菌及与其近缘或传播途径类似的菌株配制的系列浓度标准菌悬液，评价Bps–UPT–LF试纸条的敏感度、准确度、精密度及特异度等检测性能后，采用纯生物化学试剂和模拟样本分别对其进行单因素干扰因子和实际样品的耐受性评价，通过调整该方法的液体量取体积评价其对操作误差的耐受性。

结果

整个检测流程20 min内可完成，Bps–UPT–LF试纸的敏感度达10⁴ CFU/ml，定量范围为10⁴～10⁷ CFU/ml，跨越了4个数量级。浓度为10⁷和10⁸ CFU/ml高浓度的类鼻疽菌近缘或传播途径近似菌株对检测特异度均无影响。Bps–UPT–LF试纸除能在高浓度的酸碱物质(pH 1～12)、盐(≤2 mol/L的NaCl和KCl的混合物)、黏性物质(≤50 g/L的聚乙二醇20000、≤20%的甘油)、生物基质(≥400 g/L的牛血清白蛋白、≥80 g/L的干酪素)等单因素样本的干扰下保证检测特异度及敏感度外，还能对浓度≥400 g/L的奶粉、面粉、果珍、新鲜和腐败脏器以及浓度≤200 g/L的腻子粉、蔗糖、味精和土壤等各种动物、环境、粉末之类的实际样本进行直接检测。–50%～200%的样品体积偏差、–22%～44%样品处理液体积偏差、–30%～30%的上样混合物体积偏差等操作误差对检测特异度和敏感度无影响。

结论

本研究建立的基于Bps–UPT–LF技术检测类鼻疽菌的方法从检测性能、耐受性等方面均可满足自然疫源地监测和生物反恐对类鼻疽菌进行现场快速定量检测的需求。