【摘 要】
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目的体外培养兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs),观察其生物学特性。方法用含20%胎牛血清DMEM:F12(1:1)培养基对兔LSCs进行体外培养,倒置显微镜及HE染色观察培养细胞体
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目的体外培养兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs),观察其生物学特性。方法用含20%胎牛血清DMEM:F12(1:1)培养基对兔LSCs进行体外培养,倒置显微镜及HE染色观察培养细胞体外生长的形态,免疫细胞化学AE5和P63染色鉴定并进行图像分析,透射电镜观察超微结构特点。结果培养2～3d细胞从组织块游出,6～8d形成良好的单层,细胞多呈圆形或卵圆形。电镜观察,培养7dLSCs呈卵圆形,表面有少量微绒毛突起;胞质内细胞器少,核大,核仁明显,核浆比例大,部分细胞可见双核现象。免疫组化观察,培养第7天,大量细胞AE5免疫反应染色呈阴性,阳性细胞数量较少,大量细胞P63免疫反应染色呈阳性;培养第14天,AE5阳性细胞数明显增多,免疫反应染色增强,阳性细胞的平均灰度值显著降低(7d:184.30±9.85,14d:133.36±25.00,P<0.01)。P63免疫反应阳性细胞数第14天与第7天相比明显减少,而阳性细胞的平均灰度值显著增高(7d:108.13±17.96,14d:177.59±7.86,P<0.01)。结论应用组织培养方法获得的原始细胞具有与体内正常LSCs相一致的形态特征;培养第7天为LSCs生长的峰值期。
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