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目的:1.运用生物信息学的方法对细粒棘球蚴延伸因子-1和磷酸丙糖异构酶T、B细胞表位以及各级结构进行预测,获得可取的抗原表位,对两者的免疫诊断性初步分析,了解其诊断价值。2.利用原核表达技术,通过对上述两种基因构建表达载体,获得重组蛋白,为后期免疫保护和诊断价值等研究奠定基础。方法:1.经Expasy系统预测两种基因的理化性质,使用DNAStar软件来分析蛋白亲水性、柔性区域、抗原指数及表面可及性,利用ABCpred与IEDB软件综合预测B细胞线性抗原表位,通过DNAStar软件预测T细胞表位,使用SOPMA软件预测二级结构,SWISS-MODEL网站构建三维结构。使用DNAstar软件对Eg和人类EF-1、TPI的氨基酸序列进行比对。2.通过RT-PCR获得目的基因与克隆载体连接形成重组质粒,重组质粒与p ET-28α(+)经双酶切连接成原核表达重组质粒,表达、纯化目的蛋白。用ELISA方法分别对37例囊型包虫、29例泡型包虫患者、16例正常人的血清检出率测定,了解其诊断价值。结果:1.EgEF-1亲水性得分较高的区域有7个;6个柔性区域;抗原性指数得分较高的区域分布与柔性区域一致;表面可及性得分较高的区域较少;可能的B细胞线性表位区域是:120-130、286-295、306-320、365-378;可能的优势性T细胞表位区域是:34-48、164-177、222-244、280-290、321-330、396-407;Eg EF-1的二级结构中α螺旋占32.81%、β折叠22.54%、β转角10.94%、无规则卷曲33.71%;序列比对,Eg EF-1与人类EF-1的一致性为35.06%,Eg TPI与人类TPI的一致性为8%。Eg TPI亲水性得分较高的区域有8个;8个柔性区域;抗原性指数得分较高的区域分布与柔性区域大部分一致;表面可及性得分较高的区域分布区域相对较少;可能的B细胞线性表位的氨基酸序列为:28-39、50-60、70-80、131-139、150-159、213-231。Eg TPI二级结构中α螺旋占36%、β折叠22.00%、β转角12.00%、无规则卷曲30.00%;可能的优势性T细胞表位区域为:16-30、71-85、98-119、142-154、178-200。2.成功构建重组表达载体,诱导纯化出重组蛋白Eg EF-1的分子量在34KD左右,Eg TPI的分子量在27KD左右。ELISA结果显示,Eg EF-1血清检测阳性率为0,但OD值普遍较高,Eg TPI细粒棘球蚴病患者阳性检出率为86.48%,多房棘球蚴患者阳性检出率为72.41%,与健康人群比较,差异具有统计学意义(P<0.05),但CE和AE间差异没有显著性。结论:1.通过对抗原表位的预测,Eg EF-1有4个B细胞表位的区域、6个优势性T细胞表位区域,Eg TPI有6个可能形成B细胞表位的区域、5个优势性T细胞表位区域,这些抗原表位预示可作为免疫诊断和药物治疗靶点2.成功纯化重组蛋白后,Eg EF-1对两种病人血清检测结果无阳性例数;Eg TPI检测结果表明,细粒患者与多房患者之间存在交叉反应,Eg TPI重组蛋白无种属特异性。