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细菌感染疾病曾是危害生命最严重疾病之一，也是常见的造成临床死亡原因之一。伴随着青霉素的诞生及一系列抗生素应用，细菌性传染病得到了有效控制，其病死率大幅下降。然而，由于抗菌药物滥用，病原菌普遍产生耐药性，造成病人治疗无效，甚至危机生命。为了克服耐药，新的抗生素尤其广谱抗生素广泛应用于临床，在抗生素压力选择和诱导下，细菌又会产生新的耐药基因，最后导致临床出现不治性感染性疾病。由此可见，如何合理应用抗生素、避免盲目滥用抗生素、减少病原菌耐药株产生，如何了解、预测病原菌耐药株的出现，避免其耐药性的传播，是医学界面临的重要课题之一。不同地区、不同医院临床病原菌耐药性各有其特点，此与不同地区、不同医院所选抗生素种类及用量不同而有所差别；也与不同地区、不同医院耐药菌所携带耐药酶基因种类不同及耐药菌水平传播相关联。因此掌握本地区细菌对抗生素耐药特点，了解临床感染病菌产生耐药酶状况，对本地区合理应用抗生素，防止耐药菌产生，预防难治性感染性疾病出现，挽救病人生命具有十分重要意义。
目前，感染性疾病的治疗除了应用抗生素外，中草药对感染性疾病作用效果日益受到重视，中草药由于毒副作用小，费用低，在细菌普遍产生耐药性的今天倍受关注。然而，目前中药的抗菌谱及作用机理不甚明了，对于各种病原菌耐药状况有待于探索，病原菌对中草药是否存在耐药问题，有待于研究。因此调查中草药对临床常见病原菌抑菌状况、了解中草药与抗生素联合应用治疗感染，减少抗生素耐药菌株产生，解决病原菌多重耐药问题具有重要意义。
[目的]：
1．研究临床住院患者致病菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌)耐药菌谱及致病菌携带耐药酶比。
2．研究中草药对临床常见病原菌抑菌效果，为临床分析用药提供客观的实验室依据，为中草药联合抗生素治疗细菌感染性疾病提供客观论据。
[方法]：
1．标本及来源：病原菌276株，分别来自2005年2月～2006年12月山东中医药大学附属医院住院感染患者的标本分离株，其中大肠埃希81株，肺炎克雷伯菌46株，铜绿假单胞菌92株，金黄色葡萄球菌57株。
2．耐药谱检测及耐药酶表型测定：
(1)抗生素药敏：应用Kirby-Bauer法，将0.5麦氏单位菌液均匀涂布整个琼脂平板，分别用24种抗生素：阿米卡星、阿奇霉素、阿莫西林、氨曲南、氨卞西林、头孢曲松、舒普深、头孢唑啉、头孢西丁、头孢呋新钠、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢吡肟、环丙沙星、庆大霉素、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸、左旋氧氟沙星、诺氟沙星、哌拉西林、氨卞西林/舒巴坦、替卡西林/棒酸、妥布霉素、特治星、亚胺培南、米诺环素、美洛培南、克林霉素、红霉素、呋喃妥因、氧氟沙星、苯唑西林、青霉素、喹奴普汀/达福普汀、利福平、复方新诺明、替考拉宁、万古霉素、四环素的药敏纸片，贴于平板表面，35℃孵育18～24h后，获取抑菌环直径，从而测定大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌的耐药谱，按照临床实验室标准化协会(CLSR)制定的标准，判定其耐药结果。用WHONET软件进行统计，分析耐药率，对比携带耐药酶与非耐药酶病原菌耐药谱的差异。
(2)ESBLs的表型确证试验：菌液涂布琼脂平皿及贴药敏纸片的方法同上，按照临床实验室标准化协会(CLSR)制定的标准，确定耐药酶：当头孢他啶、头孢噻肟2种药物中有任何一种，在加克拉维酸后，抑菌环直径与不加克拉维酸的抑菌环直径相比，增大数值≥5衄时，判定为产ESBLs。
(3)诱导酶测定：采用纸片相邻法，菌液涂布琼脂平皿及贴药敏纸片的方法同上，以亚胺培南为诱导剂贴在平皿中央，以头孢他啶、头孢噻肟、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸，作为β-内酰胺酶的靶目标物，贴在亚胺培南的周围，经35℃培养18～24h后观察结果，作为目标物的抗菌素纸片在朝向亚胺培南侧的抑菌环有一切面，呈不完全抑菌环(或截平抑菌环)，而远离亚胺培南侧的抑菌环呈完全抑菌环，如完全抑菌环侧半径与截平抑菌环侧半径的差值大于4mm即判为诱导酶阳性。
3．中药抗菌谱初步检测：
(1)中药提取：大青叶、苦参、连翘、金银花、夏枯草各200g，经微型植物粉碎机粉碎后，用90％乙醇浸泡24h，过滤至烧杯后，用直流电热套蒸发浓缩至200ml，获得提取液(浓度为1g/ml)。
(2) 中药抑菌试验(牛津小杯方法)：涂布平板同K-B法。平板背面标明中药名称，用无菌镊子取牛津小杯，放于所标相应药名的琼脂平板上，用加液器无菌操作吸入不同药液，分别注入相对应牛津小杯内至满，放于35℃孵箱内，孵育8～12h后，标尺测量抑菌环直径，分析和对比中草药对病原菌的抑制状况。
[结果]：
1．大肠埃希菌耐药率最低为亚胺培南和美洛培南，其结果全部敏感。低于50％的药物为：头孢他啶/克拉维酸3.70％、特治星19.75％、头孢噻肟/克拉维酸20.99％、头孢他啶23.46％、阿米卡星25.92％、舒普深40.74％。同时耐药率最高的前五位为：氨卞西林93.83％、哌拉西林91.36％、环丙沙星87.65％、诺氟沙星86.42％、头孢哌酮79.01％。携带ESBLs的大肠埃希菌株检出率69.14％。亚胺培南和美洛培南未见耐药株。耐药率低于50％为：头孢他啶/克拉维酸3.57％、特治星26.79％、头孢噻肟/克拉维酸30.36％、头孢他啶和阿米卡星为32.14％。同时耐药率最高的为氨卞西林、头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢呋新钠、哌拉西林，耐药率高达100％，其次环丙沙星和诺氟沙星为96.43％。
2．肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美洛培南抗生素全部敏感，其次耐药率最低前五位中：头孢他啶/克拉维酸6.52％、头孢他啶21.74％、头孢噻肟/克拉维酸28.26％、特治星和头孢吡肟30.43％。同时耐药率高于60％为：氨卞西林97.83％、哌拉西林和米诺环素73.91％。携带ESBLs肺炎克雷伯菌株检出率41.30％。其中耐药率低于50％为：头孢他啶/克拉维酸5.26％、头孢他啶42.11％、头孢噻肟/克拉维酸和特治星47.37％。同时耐药率最高为氨卞西林、头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢呋新钠、哌拉西林，耐药率高达100％，其次为氨卞西林/舒巴坦89.47％、米诺环素和妥布霉素84.21％、替卡西林/棒酸78.95％、氨曲南和诺氟沙星73.68％。
3．铜绿假单胞菌耐药率高于的80％为：氨卞西林100％、头孢呋新钠100％、米诺环素98.91％、氨卞西林/舒巴坦97.83％、头孢噻肟83.70％、头孢噻肟/克拉维酸81.52％。耐药率最低的前四位抗生素为：头孢他啶/克拉维酸22.83％、阿米卡星23.92％、头孢他啶和头孢吡肟25.00％。铜绿假单胞菌对亚胺培南和美洛培南耐药率为31.52％和38.04％。对β-内酰胺类、氨基糖甙类、氟喹诺酮类和亚胺培南等常用抗菌药物全部耐药的泛耐药铜绿假单胞菌菌株为5株，检出率为：5/92。铜绿假单胞菌经诱导试验获得产诱导酶菌株共21株。
4．耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率52.6％(30/57)。MRSA比MSSA耐药率高，MRSA耐药率为100％的药物为：阿奇霉素、克林霉素、红霉素、头孢西丁、苯唑西林、青霉素、哌拉西林、氨卞西林。MSSA大于80％的药物为：青霉素100％、哌拉西林100％、氨卞西林92.59％。金黄色葡萄球菌耐药率低的药物：万古霉素全部敏感、替考拉宁1.75％、喹奴普汀/达福普汀3.51％、呋喃妥因和复方新诺明3.51％。
5．所试中药对多数大肠埃希菌抑菌效果不明显，只有少数菌株出现大于/等于10mm的抑菌环：连翘8.64％(7/81)、金银花7.41％(6/81)、大青叶6.17％(5/81)、夏枯草4.94％(4/81)、苦参3.70％(3/81)；同样，肺炎克雷伯菌：连翘10.87％(5/46)、大青叶8.70％(4/46)、金银花6.52％(3/46)、苦参2.17％(1/46)、夏枯草2.17％(1/46)；而铜绿假单胞菌：大青叶15.22％(14/92)、连翘11.96％(11/92)、金银花5.43％(5/92)、夏枯草4.35％(4/92)、苦参2.17％(2/92)、相对于上述革兰氏阴性杆菌，金黄色葡萄球菌出现大于/等于10mm的抑菌环的菌株较多：大青叶96.49％(55/57)、苦参85.96％(49/57)、连翘78.95％(45/57)、金银花50.88％(29/57)、夏枯草36.84％(21/57)。
[结论]：
1．大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌具有严重耐药现象，提示临床应用抗生素需在药敏实验指导下进行。
2．携带ESBLs与非携带ESBLs菌株耐药谱具有显著差异，携带ESBLs菌株耐药谱更广。
3．MRSA与MSSA耐药谱有显著性差异，MRSA耐药谱更广。
2．大青叶对金黄色葡萄球菌有良好的抑菌活性，抑菌率高达96.49％。其次为苦参，抑菌率达85.96％。而连翘抑菌率为78.95％。
3．中草药抑菌谱：5种中药对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌无显著的体外抑菌效果，而对金黄色葡萄球菌有良好的抑菌效果。
4．中草药在抑菌方面是否存在协同现象，需进一步研究。
5．细菌对中药是否存在耐药问题，有待于进一步探讨。